血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(ACE2)在奶牛乳腺中的表達(dá)分布及其抗損傷作用.pdf

1、本研究旨在研究在ACE2在奶牛乳腺組織中的表達(dá)分布及其抗損傷作用。研究主要包括以下兩方面的內(nèi)容:
　　1 ACE2/ACE在奶牛乳腺中的表達(dá)及細(xì)胞定位
　　本研究通過(guò)RT-PCR、Western-Blot及免疫熒光檢測(cè)技術(shù)確定RAS系統(tǒng)在奶牛乳腺組織中的表達(dá)及細(xì)胞定位。試驗(yàn)分別選用健康泌乳期荷斯坦奶牛乳腺活體取樣的組織樣品和牛乳腺上皮細(xì)胞（Mac-T細(xì)胞），進(jìn)行如下試驗(yàn):1）RT-PCR法確定ACE和ACE2在奶牛乳腺組織中

2、的mRNA表達(dá);2）ACE2基因克隆、擴(kuò)增并鑒定;2）Western Blot法確定ACE和ACE2蛋白在乳腺組織中的表達(dá);4）免疫熒光法確定ACE/ACE2蛋白在牛乳腺上皮細(xì)胞中的細(xì)胞定位。結(jié)果:1）RT-PCR結(jié)果顯示:奶牛乳腺組織中ACE和ACE2基因均有表達(dá);2)ACE2目的基因的PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆鑒定、測(cè)序大小為202bp，與預(yù)期一致;3）Western Blot結(jié)果得到了ACE/ACE2特異性條帶，證實(shí)奶牛乳腺組織中有兩種蛋白

3、的表達(dá);4）細(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示:ACE和ACE2蛋白在牛乳腺上皮細(xì)胞中有分布。本研究首次證實(shí)牛乳腺中有ACE2和ACE的存在，為進(jìn)一步研究ACE2在乳腺組織中的抗損傷作用提供了依據(jù)。
　　2 ACE2在長(zhǎng)期飼喂高精料日糧奶牛乳腺中的抗損傷作用
　　6頭健康泌乳期荷斯坦奶牛，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（精粗比4:6）和高精料組(精粗比6:4);采用單欄定時(shí)定量飼喂，并擠奶，收集乳樣。飼喂第20周，活體取乳腺組織，進(jìn)行如下試驗(yàn):1）常

4、規(guī)法測(cè)定乳中體細(xì)胞數(shù)、LPS含量及乳中和乳腺組織中NAGase、MPO和AKP的酶活力;2）乳腺組織的形態(tài)學(xué)檢測(cè);3）Real-time PCR法分析乳腺組織中ACE、AT1、ACE2、Mas的mRNA表達(dá)水平;4）ELISA法檢測(cè)AngⅡ、Ang1-7含量。結(jié)果:1）高精料組奶牛乳中體細(xì)胞數(shù)、LPS含量、NAGase和AKP活力均顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，MPO活力兩組之間無(wú)顯著差異;2）HE染色結(jié)果顯示高精料組奶牛乳腺組織

5、有炎性損傷變化;3）與正常對(duì)照組相比，高精料組奶牛乳腺組織中ACE、AT1、ACE2、Mas mRNA表達(dá)量均顯著升高(P＜0.05)，ACE2/ACE比值高于正常對(duì)照組;4）與正常對(duì)照組相比，高精料組奶牛乳腺組織中Ang1-7含量顯著升高(P＜0.05);AngⅡ的含量則顯著降低(P＜0.05)結(jié)論:長(zhǎng)期飼喂高精料日糧對(duì)奶牛乳腺造成一定程度的損傷，乳腺中RAS處于激活狀態(tài)，以ACE2-Ang1-7-Mas軸的活力處于優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，即ACE