血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE及ACE2在大鼠煙霧吸入肺損傷后肺及腎組織內(nèi)的表達(dá).pdf

1、目的：
　　建立具有穩(wěn)定性，可重復(fù)并且適用于研究煙霧吸入性肺損傷的動(dòng)物模型。通過(guò)觀察煙霧吸入性肺損傷短期時(shí)間內(nèi)大鼠的表現(xiàn)、肺組織病理形態(tài)和含水量的改變來(lái)評(píng)價(jià)煙霧吸入肺損傷動(dòng)物模型的可靠性及其肺損傷的程度。觀察煙霧吸入性肺損傷大鼠肺、腎組織中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE和ACE2表達(dá)的時(shí)程改變，從而分析ACE和ACE2在煙霧吸入傷后大鼠肺、腎內(nèi)可能的參與機(jī)制。
　　方法：
　　1.建立煙霧吸入性肺損傷大鼠模型
　　選用2

2、月齡二級(jí)雄性SD（SpragueDawley）大鼠30只，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，體重220±20克。按照序號(hào)完全隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N)、致傷1h組(A)、致傷4h組(B)、致傷10h組(C)、致傷24h組(D)，每組各6只。參照謝爾凡等第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院燒傷病研究所的方法建立煙霧吸入性肺損傷動(dòng)物模型，予以吸煙10min后間隔5min，共3次。制模完畢立即測(cè)量大鼠呼吸頻率，呼吸頻率大于30次/分的可納入試驗(yàn)。
　　2．致傷組大

3、鼠肺組織損傷評(píng)價(jià)
　　在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（致傷后1h,4h,10h及24h）分別脫頸處死對(duì)應(yīng)致傷組及正常對(duì)照組的大鼠，取其完整的肺組織做好標(biāo)記，放入-80℃冰箱中凍存。分別取各組大鼠的左上肺及左下肺組織進(jìn)行肺組織濕/干重測(cè)定，HE染色后觀察組織病理學(xué)改變，對(duì)致傷大鼠的肺組織損傷程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　3.大鼠肺、腎組織ACE、ACE2表達(dá)的測(cè)定
　　按組別不同在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)（致傷后1h,4h,10h及24h）脫頸處死對(duì)應(yīng)組大鼠以及

4、正常對(duì)照組大鼠，取其肺組織的同時(shí)暴露腹腔，取出完整腎組織，做好標(biāo)記，放入-80℃冰箱中待用。取出剩余肺組織及腎組織分為兩部分分別應(yīng)用免疫組化及免疫印記法對(duì)各組大鼠肺、腎組織的ACE、ACE2進(jìn)行半定量測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　1．大鼠的一般情況
　　致傷組大鼠呼吸頻率均大于30次/分，出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、哮鳴音、精神萎靡，行動(dòng)遲緩等癥狀，均納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.大鼠造模后的評(píng)價(jià)
　　致傷組大鼠的肺組織濕

5、/干重均顯著高于正常對(duì)照組（P<0.05或P<0.01）。光鏡下，正常肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁完整，肺間質(zhì)無(wú)滲出。致傷組可見(jiàn)：肺內(nèi)小血管及肺泡隔毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，肺泡壁破裂，肺泡隔及肺泡腔內(nèi)出血，肺泡塌陷實(shí)變，肺間質(zhì)水腫，肺泡隔增寬，小血管周圍、肺泡隔及肺泡腔內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞增多，肺泡和肺間質(zhì)中有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著時(shí)間進(jìn)程，損傷加重。在損傷后10小時(shí)及24小時(shí)的大鼠肺組織較損傷后1小時(shí)和4小時(shí)在組織充血、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和間質(zhì)水腫等方面均

6、更嚴(yán)重。
　　3.大鼠肺組織ACE、ACE2表達(dá)的變化
　　免疫組化的結(jié)果顯示ACE、ACE2在正常肺細(xì)胞膜上有表達(dá)。ACE與ACE2蛋白協(xié)同表達(dá)于肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細(xì)胞，細(xì)支氣管上皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和肺血管平滑肌細(xì)胞。ACE2在細(xì)支氣管上皮細(xì)胞的密度與肺泡上皮和肺血管平滑肌大致相似。
　　肺內(nèi)ACE與ACE2在傷后不同實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)不同。致傷后各組與正常對(duì)照組相比，肺ACE表達(dá)升高（P<0.05;N:1.00,A:1.37

7、,B:1.51,C:1.73,D:2.04），而且在傷后24h內(nèi)肺ACE表達(dá)不斷升高。肺ACE2在致傷后1h組與正常對(duì)照組之間差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（A:1.10,N:1.00,P＞0.05），而致傷后4h、10h、24h組與正常對(duì)照組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（N:1.00,A:1.10,B:1.38,C:1.59,D:1.85,P＜0.05），因此肺ACE2表達(dá)在致傷后1－4h開(kāi)始明顯升高。
　　4.大鼠腎組織ACE、ACE2表達(dá)的變化

8、
　　ACE與ACE2在腎臟中協(xié)同表達(dá)于腎小管，尤其是腎小管的刷狀緣，腎小球以及腎臟的細(xì)胞質(zhì)中。腎組織ACE表達(dá)在正常對(duì)照組與傷后1、4、10及24h組之間的差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為9％、10％、12％、15％及16％，P>0.05），而同樣的，腎組織ACE2在各組中的表達(dá)亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（分別為14％、13％、15％、17％及20％，P>0.05），因此各組間腎組織ACE及ACE2表達(dá)無(wú)明顯差別，其蛋白測(cè)定結(jié)果與以上大致相同，結(jié)

9、果未顯示。
　　結(jié)論：
　　反復(fù)多次煙霧吸入可誘導(dǎo)成年大鼠出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、精神萎靡等典型肺損傷表現(xiàn)，表現(xiàn)出明顯的肺水腫等急性肺損傷的病理學(xué)改變，因此上述方法可制成穩(wěn)定、可靠的煙霧吸入肺損傷動(dòng)物模型。
　　煙霧吸入性肺損傷后24小時(shí)內(nèi)，肺組織ACE的表達(dá)從傷后即開(kāi)始不斷增多，而肺組織ACE2的表達(dá)從傷后1～4h左右才開(kāi)始不斷增多。但是在致傷大鼠的腎組織，ACE與ACE2的表達(dá)變化不大。說(shuō)明ACE、ACE2具有組織