百草枯急性中毒大鼠肺組織ACE、ACE2基因表達(dá)及二巰丙磺鈉的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 探討百草枯急性中毒大鼠肺組織ACE、ACE2的基因表達(dá)變化以及二巰丙磺鈉對(duì)其的保護(hù)效應(yīng) 方法： 1.清潔級(jí)SD大鼠100只，隨機(jī)分10組，每組10只，雌雄各半。第1組：正常對(duì)照組(NC組)：予以右腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.45ml，處理后24h時(shí)以10％的水合氯醛麻醉活殺。第2組：二巰丙磺鈉組(Na-DMPS組)：予以右腹腔內(nèi)注射二巰丙磺鈉(200mg/kg)，處理后24h時(shí)以10％的水合氯醛麻醉活殺。第3、

2、5、7、9組：百草枯急性中毒組(PQ組)，予以左腹腔內(nèi)注射百草枯(濃度為1％，劑量為20mg/kg)，構(gòu)建百草枯急性中毒的大鼠模型，并分別于染毒后6h、24h、3d、7d時(shí)以10％的水合氯醛麻醉活殺。第4、6、8、10組：二巰丙磺鈉保護(hù)組(Na-DMPS+PQ組)，予以右腹腔內(nèi)注射二巰丙磺鈉(200mg/kg)，15分鐘后予左腹腔內(nèi)注射百草枯(濃度、劑量同上)，構(gòu)建二巰丙磺鈉保護(hù)的大鼠模型，并分別于染毒后6h、24h、3d、7d時(shí)以10

3、％的水合氯醛麻醉活殺。各組大鼠活殺后打開胸腔取左肺相同部分行蘇木素-伊紅(HE)染色進(jìn)行病理觀察，余肺組織冷生理鹽水沖洗后-70℃凍存待檢ACE及ACE2。2.觀察PQ組及Na-DMPS+PQ組大鼠在染毒后6h、24h、3d、7d時(shí)的行為學(xué)變化(精神狀態(tài)、呼吸、進(jìn)食狀況、四肢肌力等)及光鏡下肺組織病理學(xué)改變。3.采用Trizol試劑提取各組大鼠肺組織總RNA，以總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后以cDNA為模板，以ACE和ACE2引

4、物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果用凝膠圖像分析系統(tǒng)(Gel-Pro Analyzer Version3.0)分析，以目的因子/β-actin的比值表示目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析等分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.PQ組大鼠于染毒后1h即出現(xiàn)煩躁，2h后出現(xiàn)靜伏少動(dòng)、攝食減少，5h

5、后出現(xiàn)毛蓬松、呼吸急促、抽搐、四肢肌力下降等表現(xiàn)，24h～3d呼吸急促，鼻翼煽動(dòng)，口唇紫紺，四肢肌力下降最明顯且體重下降，3d～7dB寸部分大鼠精神狀態(tài)仍萎靡、呼吸費(fèi)力；Na-DMPS+PQ組大鼠亦出現(xiàn)類似PQ組大鼠的表現(xiàn)，但時(shí)間延遲且癥狀減輕：染毒后5h才開始出現(xiàn)煩躁、易激惹，程度較PQ組輕，3d內(nèi)該組大鼠精神狀態(tài)、呼吸困難及四肢肌力改變等均明顯輕于PQ組，7d時(shí)部分大鼠基本恢復(fù)正常；NC組和NA-DMPS組大鼠無上述表現(xiàn)。2.與NC

6、組和NA-DMPS組大鼠相比，PQ組大鼠肺組織6h可見毛細(xì)血管輕微擴(kuò)張充血，肺泡內(nèi)輕度充血。中毒后24h可見肺泡結(jié)構(gòu)破壞加重，肺泡腔內(nèi)紅細(xì)胞和水腫液聚集明顯，少量炎癥細(xì)胞聚集。中毒后3d，肺內(nèi)血管、肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯，間質(zhì)和肺泡性水腫嚴(yán)重，肺出血加重成彌漫性肺出血，肺泡腔內(nèi)及周邊炎癥細(xì)胞聚集明顯逐漸加重。中毒后7d，主要是以炎癥細(xì)胞聚集為主的肺泡炎癥，可見間質(zhì)和肺泡內(nèi)有膠原沉積。而Na-DMPS+PQ組大鼠，這些肺損傷組織學(xué)表現(xiàn)較相同時(shí)間

7、點(diǎn)的染毒組明顯減輕。3.PQ組大鼠在染毒后肺組織ACE的表達(dá)先降低再升高，在24h和3d的表達(dá)明顯低于NC組和Na-DMPS組(P<0.05)，以中毒3d最低；而肺組織ACE2則在染毒后逐漸降低，3d和7d的表達(dá)較NC組和Na-DMPS組明顯降低(P<0.05)，以中毒7d最低。4.在給予Na-DMPS后，Na-DMPS+PQ組大鼠肺組織各指標(biāo)變化明顯。與NA-DMPS組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，N

8、a-DMPS+PQ組大鼠肺組織ACE的表達(dá)在24h開始顯著上升，持續(xù)到3d(P<0.05)：而肺組織ACE2的表達(dá)則在3d開始顯著上升，持續(xù)到7d(P<0.05)。 結(jié)論： 1.百草枯急性中毒大鼠肺組織ACE mRNA的表達(dá)量在中毒早期逐漸降低至最低，然后逐漸回升；百草枯急性中毒大鼠肺組織ACE2mRNA的表達(dá)量則在中毒過程中表現(xiàn)為持續(xù)降低并維持在較低水平。2.百草枯急性中毒大鼠肺組織ACE的表達(dá)變化可能反映中毒早期的肺