百草枯急性中毒大鼠氧化應(yīng)激水平變化及二巰丙磺鈉的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 觀察急性百草枯中毒大鼠血清、肺泡灌洗液和肺組織勻漿氧化應(yīng)激水平變化及二巰丙磺鈉的干預(yù)影響，探討大鼠百草枯致肺損傷的機(jī)制和二巰丙磺鈉的保護(hù)作用。 方法： 1．清潔級(jí)雄性SD大鼠80只，隨機(jī)分成4組。正常對(duì)照組NC組）：8只，予相應(yīng)體積的生理鹽水腹腔注射。二巰丙磺鈉對(duì)照組（Na-DMPS組）：8只，以200mg/kgNa-DMPS腹腔注射。百草枯急性中毒組（PQ組）：32只，予1％的百草枯溶液（20mg/kg

2、）一次性左腹腔注射染毒。二巰丙磺鈉干預(yù)組（PQ+Na-DMPS組）：32只，予右腹腔注射200mg/kg Na-DMPS后15min，予1％百草枯20mg/kg一次性左腹腔注射染毒，建立大鼠PQ急性中毒Na-DMPS保護(hù)模型。NC組及Na-DMPS對(duì)照組于處理后1d，PQ組及PQ+Na-DMPS組分別于染毒后6h、1d、3d、7d每時(shí)間點(diǎn)取8只，以10％的水合氯醛麻醉大鼠，下腔靜脈取血，留取血清，并行右側(cè)支氣管肺泡灌洗，用5ml生理鹽水

3、反復(fù)灌洗3次，最后一次回收的液體離心后留取上清液待測(cè)，取左肺相同部分肺組織制備勻漿（100mg肺組織：0．9ml生理鹽水），余肺組織用于Nrf2mRNA的檢測(cè)。檢測(cè)各組血清、支氣管肺泡灌液、肺組織均漿中的CAT活力、MDA水平，檢測(cè)各組血清、肺組織均漿中的GSH含量。 2．采用Trizol試劑提取各組大鼠肺組織總RNA，以總RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后以cDNA為模板，以大鼠Nrf2引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊

4、脂糖凝膠電泳，電泳結(jié)果用凝膠成像系統(tǒng)成像，Gel-Prov3．1分析軟件進(jìn)行分析，以（目的基因/β-actin）為該基因表達(dá)的相對(duì)值。 3．計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）表示，應(yīng)用SPSS13．0進(jìn)行方差分析，以P<0．05為差異有顯著性意義。 結(jié)果： 1．各組大鼠MDA水平變化： NC組及Na-DMPS組大鼠血清、BALF和肺組織勻漿MDA水平較低，兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同NC組相比，PQ組染毒后

5、6h、1d、3d、7d的血清、BALF和肺組織勻漿中MDA水平均明顯升高，在6h、1d達(dá)到高峰，之后逐漸降低，除第7d血清MAD水平外，與NC組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0．05）。同NC組相比，PQ+Na-DMPS組大鼠血清、BALF和肺組織勻漿MDA水平變化趨勢(shì)與PQ組相似，但與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，PQ+Na-DMPS組血清、BALF和肺組織勻漿MDA水平均有不同程度降低，其中6h及l(fā)d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。

6、2．各組大鼠CAT活力變化： Na-DMPS組較NC組大鼠血清、BALF和肺組織勻漿CAT活力輕度升高，兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同NC組相比，PQ組中毒后6h、1d、3d、7d的血清、BALF和肺組織勻漿CAT活力均明顯下降（P<0．05），6h時(shí)最明顯。同NC組相比，PQ+Na-DMPS大鼠血清、BALF和肺組織勻漿CAT活力變化趨勢(shì)與PQ組相似，但與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，PQ+Na-DMPS組血清、BALF和肺組織勻漿CA

7、T均有不同程度升高，其中6h、1d及3d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 3．各組大鼠GSH含量變化： Na-DMPS組較NC組大鼠血清和BALF中GSH含量輕度下降，兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同NC組相比，PQ組中毒后各時(shí)間點(diǎn)的血清和BALF中GSH含量均明顯下降（P<0．05），血清GSH含量在6h時(shí)最低，1d后逐漸回升，BALF中GSH含量1d時(shí)最低，3d后回升。同NC組相比，PQ+Na-DMPS組大鼠血清和BAL

8、F中GSH含量變化趨勢(shì)與PQ組相似，但與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，PQ+Na-DMPS組血清和BALF中GSH含量均有不同程度升高，其中血清6h及3d、BALF1d及3d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 4．各組大鼠肺組織Nrf2mRNA表達(dá)的變化： NC組及Na-DMPS組大鼠肺組織Nrf2mRNA表達(dá)的水平均較低，兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同NC組相比，PQ組中毒后各時(shí)間點(diǎn)的Nrf2mRNA表達(dá)的水平均有提高，3d達(dá)高

9、峰，其中1d、3d及7d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。同NC組相比，Na-DMPS干預(yù)后大鼠肺組織Nrf2mRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)與PQ組相似，但與相同時(shí)間點(diǎn)的PQ組相比，PQ+Na-DMPS組均有不同程度進(jìn)一步增多，其中1d及3d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論： 1．大鼠急性百草枯中毒6h后血清、BALF、肺組織勻漿即出現(xiàn)明顯MDA水平上升，GSH含量和CAT活力下降，肺組織Nrf2mRNA表達(dá)量上升。