Apelin在肥胖大鼠失血性休克后腸系膜淋巴管功能變化中的作用.pdf

1、失血性休克是一種常見(jiàn)的臨床急危重癥。對(duì)于重癥休克患者而言，由于不適當(dāng)?shù)难a(bǔ)液方案或者由于患者機(jī)體本身的復(fù)雜性，均可能發(fā)生繼發(fā)性損傷，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征甚至多器官功能衰竭，嚴(yán)重威脅患者的生命。研究表明，淋巴管收縮障礙與失血性休克的惡化有關(guān)，良好的淋巴管功能有助于失血性休克的逆轉(zhuǎn)。有研究報(bào)道，肥胖患者由于過(guò)量的脂肪細(xì)胞持續(xù)產(chǎn)生炎性因子致使機(jī)體始終處于低度的炎癥狀態(tài)，與淋巴管生成與結(jié)構(gòu)異常有關(guān);但肥胖后淋巴管功能有何變化，還不清楚。肥

2、胖患者發(fā)生失血性休克后，淋巴管功能的變化在肥胖患者發(fā)生休克時(shí)預(yù)后較普通人更為兇險(xiǎn)的過(guò)程中有何作用，未見(jiàn)報(bào)道。Apelin是一種內(nèi)源性多肽，具有抗氧化應(yīng)激、抗炎、保護(hù)線粒體的功能;休克發(fā)生后，Apelin含量及其受體表達(dá)均有下降。那么，能否通過(guò)給予外源性Apelin治療降低炎癥反應(yīng)，是否對(duì)失血性休克后淋巴管功能具有一定的調(diào)節(jié)作用，繼而提高失血性休克的預(yù)后，值得研究。
　　為此，本實(shí)驗(yàn)在建立肥胖大鼠模型的基礎(chǔ)上，觀察肥胖大鼠活體腸系膜

3、淋巴微循環(huán)的變化，進(jìn)一步觀察Apelin-13對(duì)肥胖大鼠失血性休克后48h存活率的影響，探討肥胖以及Apelin-13對(duì)大鼠失血性休克后離體淋巴管功能的作用。
　　首先，通過(guò)喂食13周高脂飼料制備大鼠肥胖模型，經(jīng)體重測(cè)量發(fā)現(xiàn)，大鼠喂食高脂飼料4周后，體重顯著高于正常飲食組;在喂食高脂飼料13周后，大鼠的體重身長(zhǎng)指數(shù)（Lee's指數(shù)）、平均動(dòng)脈血壓水平以及血漿甘油三酯、總膽固醇水平顯著于正常飲食組;結(jié)果提示大鼠肥胖模型建立成功。

4、r>　　隨后，將24只SD大鼠均分為休克組、休克+Apelin-13組、肥胖+休克組、肥胖+休克+Apelin-13組，休克組大鼠常規(guī)方法建立失血性休克模型，即:股動(dòng)脈放血，維持低血壓在40±2mmHg水平，90min，隨后將放出全血量加等量林格氏液（加或不加Apelin-13）通過(guò)股靜脈進(jìn)行液體復(fù)蘇;觀察Apelin-13對(duì)各組大鼠存活時(shí)間與48h存活率的影響。結(jié)果顯示，6只非肥胖大鼠失血性休克后，在48h內(nèi)死亡4只，存活2只，Ape

5、lin-13治療顯著提高了非肥胖大鼠失血性休克48h的存活狀態(tài)（存活4只，死亡2只）;12只肥胖大鼠失血性休克后，不論是否實(shí)施Apelin治療，均在48h內(nèi)全部死亡;兩組非肥胖大鼠失血性休克后的存活狀態(tài)顯著均分別好于肥胖大鼠。說(shuō)明肥胖惡化了失血性休克大鼠的存活狀態(tài)，Apelin-13治療有利于改善非肥胖大鼠失血性休克后的存活狀態(tài)。
　　然后，應(yīng)用活體淋巴微循環(huán)觀察技術(shù)，常規(guī)方法觀察回腸下段腸系膜淋巴微循環(huán)，記錄淋巴管的最大收縮口徑

6、、最大舒張口徑、靜態(tài)口徑以及收縮頻率(CF)，計(jì)算淋巴收縮性的三個(gè)指數(shù)IndexⅠ、IndexⅡ和L.D-index，評(píng)價(jià)肥胖與普通大鼠腸系膜淋巴管功能的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肥胖大鼠的CF、IndexⅠ、IndexⅡ和L.D-index等指標(biāo)均低于普通大鼠。結(jié)果提示，肥胖引起了大鼠活體淋巴管的功能障礙。
　　在前述活體腸系膜淋巴微循環(huán)觀察結(jié)束后，為了進(jìn)一步觀察Apelin-13對(duì)大鼠失血性休克后淋巴管功能的影響，將上述24只肥胖與24

7、只非肥胖大鼠隨機(jī)均分為8組，即假手術(shù)組、休克組、肥胖假手術(shù)組、肥胖休克組、假手術(shù)+Apelin-13組、休克+Apelin-13組、肥胖假手術(shù)+apelin-13組、肥胖+休克+Apelin-13組。休克組按前述方法建立失血性休克模型，Apelin-13治療的4個(gè)組分別在復(fù)蘇前或相應(yīng)時(shí)間通過(guò)靜脈注射Apelin-13溶液（100nmol/kg），在液體復(fù)蘇結(jié)束后3h，常規(guī)方法留取腸系膜淋巴管，制備淋巴管環(huán)，應(yīng)用微血管壓力-直徑測(cè)量系統(tǒng)，

8、記錄收縮末期口徑(ESD)、舒張末期口徑(EDD)以及收縮頻率(CF)以及依次加入不同濃度P物質(zhì)(1×10-8mol/L、3×10-8mol/L、1×10-7mol/L、3×10-7mol/L)ESD、EDD、CF，隨后，記錄被動(dòng)管徑(PD)，計(jì)算緊張指數(shù)(TI)、收縮幅度(CA)、泵流分?jǐn)?shù)(FPF)，聯(lián)合CF作為評(píng)價(jià)淋巴管收縮功能的指標(biāo);計(jì)算不同SP濃度下，TI、CA、CF、FPF與基礎(chǔ)狀態(tài)下的最大差值，作為評(píng)價(jià)淋巴管反應(yīng)性的指標(biāo)。結(jié)

9、果發(fā)現(xiàn)，肥胖引起了大鼠離體淋巴管收縮性和反應(yīng)性顯著低于非肥胖大鼠;不論是否肥胖，失血性休克均引起了大鼠離體淋巴管收縮性和反應(yīng)性顯著降低;Apelin-13治療均提高了休克組大鼠離體淋巴管收縮性和反應(yīng)性，且對(duì)肥胖+休克組大鼠離體淋巴管收縮性與反應(yīng)性有一定的改善作用。
　　在各組大鼠制備淋巴管環(huán)的同時(shí)，通過(guò)腹主動(dòng)脈穿刺取血，制備血漿，應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)血漿Apelin的蛋白濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正常大鼠與肥胖大鼠不管是否發(fā)生休克，4組間

10、血漿Apelin水平均無(wú)顯著變化;Apelin-13治療顯著提高了這4組大鼠血漿Apelin濃度，且組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　上述研究結(jié)果表明，失血性休克可以引起大鼠腸系膜淋巴管功能障礙，Apelin具有改善失血性休克后腸系膜淋巴管功能的作用，且顯著提高其存活時(shí)間;肥胖引起了大鼠活體與離體腸系膜淋巴管功能障礙，Apelin并不能改善肥胖大鼠離體腸系膜淋巴管功能;肥胖大鼠失血性休克后淋巴管功能較非肥胖大鼠未見(jiàn)明顯變化，但存活時(shí)間顯著降