Apelin在肥胖大鼠失血性休克后腸系膜淋巴管功能變化中的作用.pdf

1、失血性休克是一種常見的臨床急危重癥。對于重癥休克患者而言，由于不適當?shù)难a液方案或者由于患者機體本身的復雜性，均可能發(fā)生繼發(fā)性損傷，嚴重時出現(xiàn)全身炎癥反應綜合征甚至多器官功能衰竭，嚴重威脅患者的生命。研究表明，淋巴管收縮障礙與失血性休克的惡化有關，良好的淋巴管功能有助于失血性休克的逆轉。有研究報道，肥胖患者由于過量的脂肪細胞持續(xù)產(chǎn)生炎性因子致使機體始終處于低度的炎癥狀態(tài)，與淋巴管生成與結構異常有關;但肥胖后淋巴管功能有何變化，還不清楚。肥

2、胖患者發(fā)生失血性休克后，淋巴管功能的變化在肥胖患者發(fā)生休克時預后較普通人更為兇險的過程中有何作用，未見報道。Apelin是一種內(nèi)源性多肽，具有抗氧化應激、抗炎、保護線粒體的功能;休克發(fā)生后，Apelin含量及其受體表達均有下降。那么，能否通過給予外源性Apelin治療降低炎癥反應，是否對失血性休克后淋巴管功能具有一定的調(diào)節(jié)作用，繼而提高失血性休克的預后，值得研究。
　　為此，本實驗在建立肥胖大鼠模型的基礎上，觀察肥胖大鼠活體腸系膜

3、淋巴微循環(huán)的變化，進一步觀察Apelin-13對肥胖大鼠失血性休克后48h存活率的影響，探討肥胖以及Apelin-13對大鼠失血性休克后離體淋巴管功能的作用。
　　首先，通過喂食13周高脂飼料制備大鼠肥胖模型，經(jīng)體重測量發(fā)現(xiàn)，大鼠喂食高脂飼料4周后，體重顯著高于正常飲食組;在喂食高脂飼料13周后，大鼠的體重身長指數(shù)（Lee's指數(shù)）、平均動脈血壓水平以及血漿甘油三酯、總膽固醇水平顯著于正常飲食組;結果提示大鼠肥胖模型建立成功。

4、r>　　隨后，將24只SD大鼠均分為休克組、休克+Apelin-13組、肥胖+休克組、肥胖+休克+Apelin-13組，休克組大鼠常規(guī)方法建立失血性休克模型，即:股動脈放血，維持低血壓在40±2mmHg水平，90min，隨后將放出全血量加等量林格氏液（加或不加Apelin-13）通過股靜脈進行液體復蘇;觀察Apelin-13對各組大鼠存活時間與48h存活率的影響。結果顯示，6只非肥胖大鼠失血性休克后，在48h內(nèi)死亡4只，存活2只，Ape

5、lin-13治療顯著提高了非肥胖大鼠失血性休克48h的存活狀態(tài)（存活4只，死亡2只）;12只肥胖大鼠失血性休克后，不論是否實施Apelin治療，均在48h內(nèi)全部死亡;兩組非肥胖大鼠失血性休克后的存活狀態(tài)顯著均分別好于肥胖大鼠。說明肥胖惡化了失血性休克大鼠的存活狀態(tài)，Apelin-13治療有利于改善非肥胖大鼠失血性休克后的存活狀態(tài)。
　　然后，應用活體淋巴微循環(huán)觀察技術，常規(guī)方法觀察回腸下段腸系膜淋巴微循環(huán)，記錄淋巴管的最大收縮口徑

6、、最大舒張口徑、靜態(tài)口徑以及收縮頻率(CF)，計算淋巴收縮性的三個指數(shù)IndexⅠ、IndexⅡ和L.D-index，評價肥胖與普通大鼠腸系膜淋巴管功能的差異。結果發(fā)現(xiàn)，肥胖大鼠的CF、IndexⅠ、IndexⅡ和L.D-index等指標均低于普通大鼠。結果提示，肥胖引起了大鼠活體淋巴管的功能障礙。
　　在前述活體腸系膜淋巴微循環(huán)觀察結束后，為了進一步觀察Apelin-13對大鼠失血性休克后淋巴管功能的影響，將上述24只肥胖與24

7、只非肥胖大鼠隨機均分為8組，即假手術組、休克組、肥胖假手術組、肥胖休克組、假手術+Apelin-13組、休克+Apelin-13組、肥胖假手術+apelin-13組、肥胖+休克+Apelin-13組。休克組按前述方法建立失血性休克模型，Apelin-13治療的4個組分別在復蘇前或相應時間通過靜脈注射Apelin-13溶液（100nmol/kg），在液體復蘇結束后3h，常規(guī)方法留取腸系膜淋巴管，制備淋巴管環(huán)，應用微血管壓力-直徑測量系統(tǒng)，

8、記錄收縮末期口徑(ESD)、舒張末期口徑(EDD)以及收縮頻率(CF)以及依次加入不同濃度P物質(zhì)(1×10-8mol/L、3×10-8mol/L、1×10-7mol/L、3×10-7mol/L)ESD、EDD、CF，隨后，記錄被動管徑(PD)，計算緊張指數(shù)(TI)、收縮幅度(CA)、泵流分數(shù)(FPF)，聯(lián)合CF作為評價淋巴管收縮功能的指標;計算不同SP濃度下，TI、CA、CF、FPF與基礎狀態(tài)下的最大差值，作為評價淋巴管反應性的指標。結

9、果發(fā)現(xiàn)，肥胖引起了大鼠離體淋巴管收縮性和反應性顯著低于非肥胖大鼠;不論是否肥胖，失血性休克均引起了大鼠離體淋巴管收縮性和反應性顯著降低;Apelin-13治療均提高了休克組大鼠離體淋巴管收縮性和反應性，且對肥胖+休克組大鼠離體淋巴管收縮性與反應性有一定的改善作用。
　　在各組大鼠制備淋巴管環(huán)的同時，通過腹主動脈穿刺取血，制備血漿，應用ELISA方法檢測血漿Apelin的蛋白濃度。結果發(fā)現(xiàn)，正常大鼠與肥胖大鼠不管是否發(fā)生休克，4組間

10、血漿Apelin水平均無顯著變化;Apelin-13治療顯著提高了這4組大鼠血漿Apelin濃度，且組間無統(tǒng)計學差異。
　　上述研究結果表明，失血性休克可以引起大鼠腸系膜淋巴管功能障礙，Apelin具有改善失血性休克后腸系膜淋巴管功能的作用，且顯著提高其存活時間;肥胖引起了大鼠活體與離體腸系膜淋巴管功能障礙，Apelin并不能改善肥胖大鼠離體腸系膜淋巴管功能;肥胖大鼠失血性休克后淋巴管功能較非肥胖大鼠未見明顯變化，但存活時間顯著降