鈣失敏在大鼠失血性休克血管低反應(yīng)性中的作用及其調(diào)控分子.pdf

1、嚴(yán)重創(chuàng)傷/休克失代償期常出現(xiàn)血管的低反應(yīng)性，主要表現(xiàn)為全身血管對縮血管物質(zhì)和舒血管物質(zhì)的反應(yīng)降低或不反應(yīng)，目前研究發(fā)現(xiàn)它可能與NO水平增高、血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)鉀、鈣通道功能失常等誘發(fā)的NE、Ang-Ⅱ、內(nèi)皮素受體失敏以及細(xì)胞膜超極化有關(guān)，但抑制NO、改善鉀、鈣通道功能、恢復(fù)受體敏感性以及細(xì)胞膜極化狀態(tài)并不能完全逆轉(zhuǎn)休克的血管低反應(yīng)性。近年來研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重創(chuàng)傷、休克后心肌細(xì)胞存在鈣超載和鈣失敏(calciumdesensitizat

2、ion，即心肌細(xì)胞收縮蛋白對鈣的敏感性降低，收縮力/鈣比率降低)的現(xiàn)象，致使心肌細(xì)胞對以增高胞內(nèi)鈣離子濃度[Ca2+]i為主要作用機(jī)制的傳統(tǒng)強(qiáng)心藥不敏感。本實(shí)驗(yàn)室以前的研究發(fā)現(xiàn)休克后血管平滑肌細(xì)胞同樣存在鈣超載現(xiàn)象，雖然休克后血管平滑肌細(xì)胞的胞內(nèi)鈣并不低，但血管反應(yīng)性仍然是低的，因此推測休克后血管平滑肌細(xì)胞可能存在鈣失敏，鈣失敏可能在休克血管低反應(yīng)的發(fā)生中起重要作用。這方面目前國內(nèi)外尚缺乏研究。為此本研究利用大鼠失血性休克模型，以腸系膜

3、上動(dòng)脈為研究對象，研究了失血性休克后大鼠血管平滑肌是否存在鈣失敏，鈣失敏在大鼠失血性休克血管低反應(yīng)性中的作用，以及Rho-激酶、PKC和PKG對鈣敏感性的調(diào)控作用以及可能機(jī)制。 主要方法：取失血性休克大鼠腸系膜上動(dòng)脈(SMA)，利用離體血管環(huán)張力測定技術(shù)，用血管環(huán)對梯度濃度去甲腎上腺素(NE)的收縮力反映血管反應(yīng)性，用去極化狀態(tài)下(120mmol/LK+)血管環(huán)對梯度濃度Ca2+的收縮力反映血管的鈣敏感性。實(shí)驗(yàn)分三部分，第一部分

4、實(shí)驗(yàn)觀察失血性休克低反應(yīng)性血管是否存在鈣敏感性的降低，以及通過觀察鈣敏感性調(diào)節(jié)劑血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)、胰島素和Rho-激酶特異性拮抗劑fasudil是否可以通過調(diào)節(jié)鈣敏感性來調(diào)節(jié)血管反應(yīng)性，以證實(shí)鈣失敏在休克血管低反應(yīng)形成中的作用。第二部分觀察Rho-激酶激動(dòng)劑Ang-Ⅱ和拮抗劑fasudil、PKC激動(dòng)劑PMA和拮抗劑staurosporine、PKG激動(dòng)劑8Br-cGMP和拮抗劑KT-5823對失血性休克血管鈣敏感性的影響，以

5、了解Rho-激酶、PKC和PKG對鈣敏感性的調(diào)控作用。第三部分觀察MLCP拮抗劑CalyculinA對Rho-激酶、PKC、PKG調(diào)節(jié)失血性休克血管鈣敏感性的影響，以探討Rho-激酶、PKC和PKG調(diào)控鈣敏感性的可能機(jī)制。 主要結(jié)果：(1)失血性休克后低反應(yīng)性血管存在鈣敏感性下降，表現(xiàn)為失血性休克后SMA的NE量效曲線明顯右移，NE的最大收縮力(Emax)和pD2(-log[EC50])降低(P＜0.05，P＜0.01)；Ca2

6、+的量效曲線明顯右移，Ca2+的Emax和pD2降低(P＜0.05，P＜0.01)，說明失血性休克的低反應(yīng)血管存在鈣敏感性的降低。(2)具有鈣敏感性增強(qiáng)作用的Ang-Ⅱ(10-9mol/L)可使NE和Ca2+的量效曲線左移，使NE和Ca2+的Emax增高(P＜0.05，P＜0.01)，而具有鈣敏感性抑制作用的胰島素(100nmol/L)可使NE和Ca2+的量效曲線右移，NE和Ca2+的Emax進(jìn)一步降低(P＜0.05，P＜0.01)，f

7、asudil預(yù)處理可取消Ang-Ⅱ?qū)E誘導(dǎo)的血管收縮反應(yīng)的增強(qiáng)效果，降低鈣敏感性，提示鈣失敏在休克血管低反應(yīng)性的發(fā)生中起重要作用。(3)Rho-激酶的激動(dòng)劑Ang-Ⅱ、PKC的激動(dòng)劑PMA、PKG的拮抗劑KT-5823可增高失血性休克血管的鈣敏感性，表現(xiàn)為Ca2+的量效曲線明顯左移，Emax分別為0.630g/mg、0.595g/mg、0.624g/mg，均明顯高于休克組的0.377g/mg(P＜0.05，P＜0.01)；Rho-激酶

8、的拮抗劑fasudil、PKC的拮抗劑staurosporine、PKG的激動(dòng)劑8Br-cGMP可降低失血性休克血管的鈣敏感性，表現(xiàn)為Ca2+的量效曲線明顯右移，Emax分別為0.242g/mg、0.230g/mg、0.256g/mg，均顯著低于休克組的0.377g/mg(P＜0.05，P＜0.01)。提示失血性休克血管平滑肌鈣敏感性受Rho-激酶、PKC和PKG的調(diào)節(jié)，Rho-激酶、PKC可上調(diào)鈣敏感性，PKG可下調(diào)鈣敏感性。(4)C

9、alyculinA(10-7mol/L)預(yù)處理可以進(jìn)一步加強(qiáng)Ang-Ⅱ和PMA的鈣增敏作用，表現(xiàn)為Ca2+的量效曲線明顯左移，Emax分別為0.902g/mg、0.998g/mg，均顯著高于Ang-Ⅱ組(0.630g/mg)和PMA組(0.595g/mg)(P＜0.05，P＜0.01)，并可部分拮抗8Br-cGMP的降低鈣敏感性作用，表現(xiàn)為Ca2+的量效曲線有一定左移，Emax為0.377g/mg，顯著高于8Br-cGMP組(0.256

10、g/mg)(P＜0.05)。提示MLCP可能是Rho-激酶、PKC、PKG調(diào)控鈣敏感性通路的下游分子。 結(jié)論：(1)失血性休克血管平滑肌細(xì)胞存在鈣敏感性降低；血管平滑肌細(xì)胞的鈣敏感性降低在失血性休克血管低反應(yīng)性的發(fā)生中起重要作用。(2)Rho-激酶、PKC和PKG對失血性休克血管平滑肌鈣敏感性有重要的調(diào)節(jié)作用，Rho-激酶、PKC可上調(diào)失血性休克大鼠血管鈣敏感性，PKG可下調(diào)其鈣敏感性。(3)Rho-激酶、PKC和PKG調(diào)節(jié)失血