轉錄因子Nrf2在失血性休克中的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　失血性休克(Hemorrhagic shock，HS)中組織缺血產生的過多活性氧簇(ROS)在介導細胞損害以及繼而發(fā)生的全身炎癥反應綜合征和多器官功能不全綜合征中扮演著至關重要的角色。但是目前臨床上對如何去除多余ROS，防止失血性休克的繼發(fā)器官損害仍缺乏有效手段。NF-E2相關因子2(NF-E2-related factor2，Nrf2)已被發(fā)現(xiàn)是機體重要的抗氧化應激的轉錄因子。本課題意在探討Nrf2在失血性休克中的保

2、護作用及機制，為臨床上失血性休克的治療提供一個新的靶點及其理論依據(jù)。
　　方法：
　　通過雙側股動脈和一側股靜脈置管制作Nrf2基因敲除小鼠的失血性休克模型，研究Nrf2缺失對失血性休克小鼠的全身性炎癥反應，重要臟器的炎癥浸潤和細胞損害的影響。并觀察失血性休克后的腹腔巨噬細胞在LPS誘導下生成促炎因子的能力，評估轉錄因子Nrf2對HS后機體免疫細胞促炎能力的潛在調控作用。
　　1)通過測定血漿促炎因子TNF-α，IL-

3、6和IL-1β，來評估Nrf2基因缺失對于失血性休克小鼠的全身性炎癥反應的影響。并檢測血中重癥炎癥指標HMGB1的分泌。
　　2)通過肝、肺等重要器官石蠟切片的HE染色，髓過氧化物酶(MPO)活性測定，ELISA測定組織促炎因子的變化來評估Nrf2基因缺失對失血性休克小鼠重要器官的炎性浸潤程度和細胞損害情況的影響。
　　3)為了評估轉錄因子Nrf2對HS后機體免疫細胞促炎能力的潛在調控作用，我們在失血性休克小鼠液體復蘇24小

4、時后獲取小鼠腹腔巨噬細胞，并利用LPS孵育6小時。取上清，利用ELISA法進行細胞因子水平檢測。
　　結果：
　　Nrf2-KO組小鼠，相比于WT組小鼠，失血性休克后的肺部和肝臟損傷程度更加嚴重，表現(xiàn)為組織損傷增加，髓過氧化物酶(MPO)活性上升，促炎性細胞因子產生增加。而且Nrf2-KO組小鼠的系統(tǒng)炎癥反應顯著升高，表現(xiàn)為血清炎癥因子升高（白介素6，腫瘤壞死因子α及白介素1β），并且HMGB1（高遷移率組蛋白1）表達水平增