樹突狀細(xì)胞提呈滅活口蹄疫病毒抗原途徑的研究.pdf

1、口蹄疫(foot and mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMD virus，F(xiàn)MDV)引起的牛、羊、豬等偶蹄動物的一種急性、烈性傳染病，但其免疫應(yīng)答機(jī)制尚不清楚。適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動需要樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)的抗原提呈，并且DC還能交叉提呈非復(fù)制性抗原，故被稱為機(jī)體最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，但目前尚不清楚DC對FMDV抗原的提呈途徑。 為了研究DC提呈滅活FMDV抗原的途徑，研究者首先

2、將荷載了滅活FMDV抗原的DC(FMDV+DC)與淋巴結(jié)T細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，并以FMDV+DC為對照組，在共培養(yǎng)后9h，12h，24h，36h和48h，取其共培養(yǎng)物上清液，用ELISA法對其中的IFN-γ水平進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，T細(xì)胞組各時間點的IFN-γ水平都明顯高于對照組。在共培養(yǎng)后9h和48h，T細(xì)胞組(9h:13.235 6±0.003 4；48h:6.473 8+0.002 1)和對照組(9h:1.988±0.597 4；48h

3、:1.254 5±0.135 7)比較，差異極顯著(P<0.01)；共培養(yǎng)后12h，24h和36h，T細(xì)胞組和對照組比較，均有顯著性差異(P<0.05).說明IFN-γ均來自于T細(xì)胞；為進(jìn)一步明確IFN-γ是來自CD4+T細(xì)胞，還是來自CD8+T細(xì)胞，研究者先后用抗CD4單克隆抗體或CD8單克隆抗體阻斷CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞對MHC分子的識別，并將FMDV+DC分別與上述T細(xì)胞共培養(yǎng)，從而明確DC提呈滅活FMDV抗原的途徑。結(jié)果

4、顯示，同對照組相比，與FMDV+DC共培養(yǎng)后的CD4+T細(xì)胞組和CD8+T細(xì)胞組均產(chǎn)生高水平的IFN-γ.表明DC至少以MHC-Ⅱ類分子途徑和交叉途徑提呈滅活FMDV抗原。在共培養(yǎng)后9h和48h，CD4+T細(xì)胞組與對照組比較，差異均為極顯著(P

5、IFN-γ的主要來源細(xì)胞，提示DC主要以MHC-Ⅱ類分子提呈滅活FMDV抗原。 為了研究蛋白酶體和溶酶體在DC處理提呈滅活FMDV抗原過程中的作用，研究者首先用滅活FMDV荷載分別用lactacystin和氯喹處理過的DC，以FMDV+DC為對照組，然后分別和CD4+T或CD8+T細(xì)胞共培養(yǎng)。在共培養(yǎng)后9h，12h，24h，36h和48h，取其共培養(yǎng)物上清液，用ELISA法對其中的IFN-γ水平進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，同對照組相比，

6、lactacystin使CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ水平升高，而氯喹則抑制CD4+T細(xì)胞IFN-γ產(chǎn)生。說明DC提呈滅活FMDV抗原的過程依賴于溶酶體，而蛋白酶體不起決定性作用。這表明DC主要以“內(nèi)吞小體-溶酶體-MHC-Ⅱ類分子途徑”提呈滅活FMDV抗原。 總之，荷載了滅活FMDV抗原的DC能夠激活CD4+和CD8+種T細(xì)胞，且溶酶體起主要作用，說明DC對滅活FMDV抗原的提呈途徑包括MHC-Ⅱ分子抗原提呈途徑(外源性抗原提