口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白用于口蹄疫病毒感染及其免疫動物的鑒別診斷.pdf

1、口蹄疫(Foot-and-mouthdisease，F(xiàn)MD)是一種高度接觸性傳染病，對國際貿(mào)易具有深遠(yuǎn)的影響，被OIE列為A類傳染病之首。FMD控制和消滅策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群。在免疫接種的群體，大多數(shù)動物血清FMDV結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陽性，故一些基于結(jié)構(gòu)蛋白的診斷方法很難確定感染口蹄疫病毒與否。只有將感染動物和隱性帶毒動物與疫苗免疫動物加以區(qū)分才能為FMD的控制和消滅提供科學(xué)的依據(jù)。從已經(jīng)發(fā)表的鑒別感染口蹄疫病毒動物和免疫動物的

2、結(jié)果來看，3ABC和3AB是比較公認(rèn)的良好檢測用抗原，但也有一些在牛上進(jìn)行的實驗顯示，少數(shù)的免疫動物體內(nèi)存在3A抗體，這有可能是在疫苗制備過程中仍有微量3A蛋白殘留，也有可能是一些交叉抗原的抗體所致?？傊@會影響基于3ABC或3AB的檢測方法的特異性。我們利用篩選到的位于3ABC蛋白3B多肽上的保守的、具有強結(jié)合活性的F5表位建立特異性免疫檢測方法可能是克服類似問題的一種途徑。 用重組DNA技術(shù)，以pM18T-3ABC質(zhì)粒為模

3、板將F5表位(141-190位氨基酸)基因用上游引物1和下游引物擴(kuò)增得到了目的大小的基因片段(150bp左右)，將F5片段用BglⅡ和HindⅢ雙酶切，與經(jīng)BamHI和HindⅢ雙酶切的pET-28a(+)片段連接，轉(zhuǎn)化TG1，依次將6個含F(xiàn)5片段串聯(lián)，表達(dá)質(zhì)粒命名為pET-28a-F5(+6)，然后在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)，將表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和蛋白質(zhì)斑點ELISA。結(jié)果表明F5(+6)基因主要以可溶形式高效表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物具有

4、免疫原性。以純化的表達(dá)產(chǎn)物為抗原建立了間接酶聯(lián)免疫吸附試驗F5(+6)-ELISA。用307份陰性血清和30份陽性血清等檢測，結(jié)果表明，該檢測方法的特異性為96％，初步的敏感性(preliminarysensitivity)為100％。證明F5(+6)-ELISA方法可用于口蹄疫的鑒別診斷。對經(jīng)2次免疫的512份豬血清用F5(+6)-ELISA檢測，同時作IHA檢測，結(jié)果雙陽性的為2.0％。 用NS-3AB作為識別抗原建立的EL