口蹄疫病毒的血清學(xué)檢測與電鏡觀察.pdf

1、將豬抗口蹄疫病毒(FMDV)陽性血清經(jīng)飽和硫酸銨提取IgG、SephadexG-25層析純化，并標(biāo)記上異硫氰酸熒光黃(FITC)，制備熒光抗體，檢測BHK-21細(xì)胞中的FMDV抗原，結(jié)果表明：該方法可以檢出BHK-21細(xì)胞中的病毒抗原，熒光抗體的工作濃度確定為1∶40，且這種熒光能被FMDV陽性血清特異性地抑制。用制備的熒光抗體分別檢測感染FMDVCS株和LB株的BHK-21細(xì)胞抹片和飛片，結(jié)果均為陽性，空白對照均為陰性。用純化的IgG

2、致敏綿羊紅細(xì)胞，采用反向間接血凝試驗(RIHA)檢測FMDV標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原，結(jié)果表明致敏紅細(xì)胞活的力達(dá)1∶960，具有特異性，探索了致敏紅細(xì)胞的最佳實驗條件，采用致敏紅細(xì)胞對樣本進(jìn)行RIHA檢測，陽性檢出率為：水泡皮為80％(8/10)、細(xì)胞毒為94.7％(18/19)、感染乳鼠胴體毒為78％(14/18)。 通過接種BHK-21細(xì)胞傳代增殖CS株和LB株FMDV，采用蔗糖反透析處理和SephadexG-200層析的方法濃縮和純化

3、的病毒液，將病毒抗原致敏綿羊紅細(xì)胞以正向間接血凝試驗(IHA)進(jìn)行檢測，所制備的致敏紅細(xì)胞能與FMD陽性血清發(fā)生特異性凝集，且能被FMD標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原特異性抑制，采用所制診斷液對貴州某養(yǎng)牛場17份血清待檢樣本進(jìn)行了檢測，陽性率為100％(17/17)，對貴州某養(yǎng)豬場的20份血清樣本進(jìn)行檢測，陽性率為100％(20/20)；將上述病毒液采用蔗糖密度梯度離心進(jìn)一步純化，取30％～50％蔗糖區(qū)段的病毒液經(jīng)透射電鏡觀察，F(xiàn)MDV完整病毒粒子呈均質(zhì)