嚴重創(chuàng)傷對小鼠骨髓來源的樹突狀細胞誘導T細胞應答能力的影響.pdf

1、目的：創(chuàng)傷是對人類生命健康與社會生產(chǎn)的嚴重威脅之一，在我國已成為繼心腦血管疾病和惡性腫瘤之外最大的死亡原因。嚴重創(chuàng)傷后機體免疫功能紊亂可導致創(chuàng)傷后感染和器官功能障礙等并發(fā)癥，深入研究有助于我們進一步了解創(chuàng)傷及其并發(fā)癥的機制，并指導臨床治療。長期以來，針對創(chuàng)傷后免疫功能紊亂的研究涉及了中性粒細胞、單核.巨噬細胞和T、B淋巴細胞等諸多方面，但作為免疫系統(tǒng)重要的成員之一——樹突狀細胞(dendritic cell，DC)在創(chuàng)傷后免疫功能紊亂中

2、的作用和地位迄今未被闡明。DC是聯(lián)系先天性免疫和適應性免疫的橋梁，作為專職的抗原提呈細胞(APC)，DC在啟動和調(diào)節(jié)先天性及適應性免疫應答中具有關鍵性的作用。已有研究證實，機體遭遇創(chuàng)傷后，DC在其分化發(fā)育過程、抗原提呈功能和細胞因子產(chǎn)生等方面均發(fā)生了障礙。但作為中樞免疫器官的骨髓，在創(chuàng)傷后向DC分化的過程及骨髓來源DC(BMDC)的功能是否會發(fā)生改變，尚未見報道。本研究著重探討了創(chuàng)傷對小鼠BMDC刺激T細胞增殖能力的影響。 方法

3、：①制備動物創(chuàng)傷模型，致傷后24 h分離小鼠骨髓細胞，體外應用重組小鼠粒細胞/巨噬細胞-集落刺激因子(rmGM-CSF)誘導樹突狀細胞；②通過混合淋巴細胞反應(MLR)檢測未成熟、成熟DC誘導異源T細胞的應答能力；③應用流式細胞術檢測BMDC表面主要組織相容性復合物II類分子(MHC II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86表達；④應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測脂多糖(LPS)刺激的BMDC培養(yǎng)上清中白細胞介素-12(IL

4、-12)p40、IL-12 p70以及白細胞介素-10(IL-IO)水平的變化。 結(jié)果：①在同等誘導條件下，創(chuàng)傷組小鼠骨髓細胞在體外誘導的DC(CD11c陽性細胞)百分率與正常對照組相比無明顯差異，但其總數(shù)量明顯低于正常對照組(骨髓細胞誘導DC的擴增倍數(shù)分別為3.9±0.5 vs5.4±0.6，P<0.05)；②創(chuàng)傷組小鼠BMDC，在經(jīng)過LPS誘導成熟前后，其介導的MLR值均明顯低于相應的對照組值(P<0.05)；③以CDllc

5、陽性細胞圈門，創(chuàng)傷小鼠BMDC在LPS刺激前后的CD40表達均明顯低于正常對照組(4±1.0％ vs22±3.5％，P<0.01；56:t7.5％ vs91±8.0％，P<0.01)，但MHCⅡ、CD80和CD86表達在兩組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；④創(chuàng)傷組小鼠BMDC在體外經(jīng)LPS誘導成熟后，其IL-12 p40、IL-12 p70分泌水平均明顯低于正常對照組(45±6.5ng/L vs78+6.8 ng/L，P<0.05；9±

6、1.0 ng/L vs18±1.9 ng/L，P<0.05)，但分泌IL-10的能力與正常對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。兩組未成熟DC分泌上述細胞因子水平均無統(tǒng)計學差異(P>0.05) 結(jié)論：①創(chuàng)傷小鼠骨髓細胞對GM-CSF刺激增殖的敏感性降低；②創(chuàng)傷小鼠的BMDC功能發(fā)生障礙，其介導的混合淋巴細胞反應顯著降低，對T細胞增殖的激發(fā)能力受到抑制；③創(chuàng)傷小鼠BMDC誘導T細胞應答的能力降低可能與其CD40表達及IL-12分