吳茱萸堿對體外誘導分化的小鼠骨髓來源樹突狀細胞分泌細胞因子的影響.pdf

1、目的：研究吳茱萸堿對小鼠骨髓來源的樹突狀細胞生物學功能的影響,從調(diào)控樹突狀細胞功能和細胞因子分泌的角度來探討吳茱萸堿的免疫調(diào)節(jié)機制及作用靶點,為全面開發(fā)和應用吳茱萸堿提供理論依據(jù)。
　　 方法：⑴分離BALB/c小鼠骨髓細胞,經(jīng)GM-CSF體外誘導培養(yǎng)7天的iDC和經(jīng)LPS刺激的mDC,通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、流式細胞儀分析細胞表面分子表達對細胞進行鑒定和MTT法檢測混合淋巴反應中DC刺激同種異基因淋巴細胞增殖情況。⑵iDC

2、和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,MTT法檢測其在24、48和72 h時刺激同種異基因淋巴細胞增殖情況。⑶iDC和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,抗體芯片技術檢測各組細胞上清液中細胞因子的分泌情況。⑷iDC和mDC經(jīng)EVO處理24 h后,ELISA檢測各組細胞上清液中IL-13和Eotaxin-2的含量。⑸mDC組和EVO+LPS組經(jīng)抗IL-13中和抗體處理后,對其刺激同種異基因淋巴細胞增殖的影響。
　　 結果：①倒置顯微鏡下觀察細

3、胞符合典型DC形態(tài)學特征:混合淋巴反應中,mDC組吸光度值明顯高于iDC(P<0.05)；經(jīng)流式細胞儀檢測DC(CD11c+細胞)百分含量≥90％,mDC組表面標志物I-A/I-E、CD40、CD80、CD86明顯高于iDC組。②LPS組與對照組比較,LPS組吸光度值顯著高于對照組(P<0.05):EVO+LPS組與EVO組相比,EVO+LPS組吸光度值顯著高于EVO組(P<0.05)；EVO組與對照組相比,EVO組吸光度值顯著高于對照

4、組(P<0.05)；EVO+LPS組與LPS組相比,EVO+LPS組吸光度顯著高于LPS組(P<0.05)。在24h、48h、72h的實驗中,均明顯表現(xiàn)出這種趨勢。③LPS組與對照組相比較,上調(diào)大于2倍的細胞因子有14個,下調(diào)大于2倍細胞因子有1個；EVO組與對照組比較,上調(diào)大于2倍的細胞因子有7個；EVO+LPS組與LPS組相比較,上調(diào)大于2倍細胞因子有2個。④ELISA檢測各組細胞上清液中Eotaxin-2和IL-13的含量,EVO

5、+LPS組與LPS組比較,EVO+LPS組Eotaxin-2和IL-13的含量均明顯高于LPS組(P<0.05)；EVO組與對照組相比,EVO組的Eotaxin-2的含量明顯高于對照組(p<0.05),IL-13的含量增高不明顯(p>0.05)。⑤EVO+LPS組與anti-IL-13-EVO+LPS組相比,EVO+LPS組吸光度明顯增高(P<0.05)。
　　 結論：⑴分離BALB/c小鼠骨髓細胞,經(jīng)GM-CSF體外誘導培養(yǎng)7

6、天可以獲得大量穩(wěn)定的高純度DC,為進一步研究樹突狀細胞的特性和功能提供足量的實驗材料。⑵EVO促進了iDC和mDC抗原提呈功能,隨著時間的推移,DC和經(jīng)EVO處理的DC抗原提呈能力逐漸增強。⑶經(jīng)EVO處理后,DC分泌細胞因子的功能在成熟和非成熟階段都發(fā)生了明顯改變,其中EVO作用后的mDC上清中Eotaxin-2和IL-13明顯上調(diào)。這些細胞因子影響著DC的抗原攝取、遷移、抗原提呈以及自身分化成熟,為進一步尋找藥物靶點提供了線索。⑷經(jīng)過