嚴(yán)重創(chuàng)傷對(duì)小鼠體內(nèi)單核細(xì)胞向樹(shù)突狀細(xì)胞分化及遷移過(guò)程的影響.pdf

1、目的：創(chuàng)傷是嚴(yán)重威脅人類生命健康與社會(huì)生產(chǎn)的原因之一。在我國(guó)，創(chuàng)傷己成為繼心腦血管疾病和惡性腫瘤之外最大的死亡原因。嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體內(nèi)免疫功能紊亂是導(dǎo)致創(chuàng)傷后感染和器官功能障礙等并發(fā)癥的重要原因，對(duì)其的研究有助于我們進(jìn)一步了解創(chuàng)傷及其并發(fā)癥的機(jī)制，并指導(dǎo)臨床治療。長(zhǎng)期以來(lái)，針對(duì)創(chuàng)傷后免疫紊亂的研究涉及了中性粒細(xì)胞、單核一巨噬細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞等諸多方面。DC是聯(lián)系先天性免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁，作為專職的抗原提呈細(xì)胞(APC)，DC在啟動(dòng)

2、和調(diào)節(jié)先天性及適應(yīng)性免疫應(yīng)答中具有關(guān)鍵性的作用。已有研究證實(shí)，機(jī)體遭遇創(chuàng)傷后。DC在其分化發(fā)育過(guò)程、抗原提呈功能和細(xì)胞因子產(chǎn)生方面均發(fā)生了障礙。DC的遷移與創(chuàng)傷的關(guān)系尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。本研究著重探討了創(chuàng)傷對(duì)小鼠體內(nèi)單核細(xì)胞從外周向引流淋巴結(jié)遷移并分化成DC這一過(guò)程的影響。 方法：①在小鼠后肢足板皮下注射FITC熒光微球，獲取胭窩引流淋巴結(jié)總細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)，觀察引流淋巴結(jié)總細(xì)胞中FITC陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及所占比例、MH

3、CⅡ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及所占比例和FITC陽(yáng)性細(xì)胞中MHCⅡ陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及所占比例；②在小鼠耳片皮下注射FITC熒光微球，經(jīng)18小時(shí)和72小時(shí)后于倒置熒光顯微鏡和(或)激光共聚焦下觀察注射局部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況及局部組織熒光強(qiáng)度；③應(yīng)用丙酮提取法檢測(cè)小鼠耳片局部殘余熒光物質(zhì)并計(jì)算局部熒光物質(zhì)清除率；④應(yīng)用熒光微球腹腔內(nèi)負(fù)載單核細(xì)胞并轉(zhuǎn)移的方法，觀察已吞噬熒光微球的單核細(xì)胞由外周向引流淋巴結(jié)遷移的情況。 結(jié)果：①嚴(yán)重創(chuàng)傷小鼠胭窩引流淋巴結(jié)

4、FITC熒光陽(yáng)性細(xì)胞百分比(0.021±0.009％)及絕對(duì)數(shù)量(492±211)均顯著低于正常對(duì)照組動(dòng)物(0.040±0.012％，726±218，P<0.05)；胭窩淋巴結(jié)總細(xì)胞中MHCⅡ陽(yáng)性細(xì)胞比率(20.79±2.79％)和MHCⅡ陽(yáng)性細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量(0.51±0.10×10<'6>)顯著高于正常對(duì)照組(17.39±2.11％，0.31±0.06×10<'6>，P<0.05)；FITC陽(yáng)性細(xì)胞中MHCⅡ陽(yáng)性細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量(320±1

5、12)顯著低于正常對(duì)照組(707±197，P<0.05)；FITC陽(yáng)性細(xì)胞中MHCⅡ陽(yáng)性細(xì)胞比率(83.33±28.87％)與正常對(duì)照組(88.90±19.23％)比較無(wú)顯著性差異；②致傷后早期創(chuàng)傷動(dòng)物：FITC微球注射局部炎性單核細(xì)胞浸潤(rùn)較正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)，浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞CD11b表達(dá)亦明顯增強(qiáng)；③嚴(yán)重創(chuàng)傷組動(dòng)物注射微球后1天、2天、4天和6天耳片殘余熒光值低于正常對(duì)照組，注射微球后1天和4天組間差異非常顯著(P<0.01)，其余時(shí)

6、相點(diǎn)差異顯著(P<0.05)；嚴(yán)重創(chuàng)傷組動(dòng)物注射微球后1天、2天、4天和6天耳片熒光物質(zhì)清除率高于正常對(duì)照組，注射微球后1天和4天組間差異非常顯著(P<0.01)，其余時(shí)相點(diǎn)差異顯著(P<0.05)；④正常動(dòng)物腹腔灌洗細(xì)胞分別注射至正常動(dòng)物和創(chuàng)傷動(dòng)物后肢足板皮下，72小時(shí)后創(chuàng)傷動(dòng)物胭窩引流淋巴結(jié)FITC陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和數(shù)量(0.09±0.02％，2249±344)顯著低于正常對(duì)照組動(dòng)物(0.22±0.05％，3974±725)(P<0