IL-27對(duì)AA患者外周血中樹突狀細(xì)胞及單核細(xì)胞的影響.pdf

1、背景：再生障礙性貧血為多種病因通過免疫途徑破壞骨髓造血干祖細(xì)胞引起的骨髓衰竭綜合征，常因造血干祖細(xì)胞缺陷、造血微環(huán)境異常、免疫異常而導(dǎo)致全血細(xì)胞減少，表現(xiàn)貧血、出血和感染而危及患者生命。AA患者中Th1、CTL細(xì)胞活化，Treg數(shù)量及功能下降，IFN-γ和TNF-α增高，而這種現(xiàn)象與IL-27產(chǎn)生的生物學(xué)作用相一致。目前研究表明AA患者骨髓上清中IL-27的水平與AA的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，疾病越嚴(yán)重，IL-27的水平就越高。而AA患者抗原

2、提呈細(xì)胞的數(shù)量及功能發(fā)生改變，這種改變是否由 IL-27引起？這就引導(dǎo)我們探究IL-27對(duì)AA患者中免疫細(xì)胞，尤其是抗原提呈細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞應(yīng)答的影響。因此，本研究的目的是探究 IL-27對(duì) AA患者抗原提呈細(xì)胞的影響，主要包括樹突狀細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖與凋亡、細(xì)胞因子分泌水平、細(xì)胞因子mRNA水平的影響，闡明IL-27在AA患者抗原提呈病理機(jī)制中的作用。
　　目的：檢測(cè)IL-27對(duì)AA患者外周血中DC與單核細(xì)胞的影響。
　　方

3、法：①采用密度梯度離心法分離 AA患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞（PBMNCs），免疫磁珠分選DC與單核細(xì)胞并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其純度；②利用CCK-8方法測(cè)定IL-27對(duì)AA患者DC與單核細(xì)胞增殖的影響；③Annexin V-PI法測(cè)定 IL-27對(duì) DC與單核細(xì)胞凋亡的影響；④流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) IL-27對(duì)AA患者DC表面共刺激分子的影響；⑤ELISA法檢測(cè)IL-27對(duì)AA患者DC與單核細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-12、IL-23、IL-27的影

4、響；⑥Real-time PCR方法測(cè)定IL-27對(duì)DC與單核細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-12、IL-23、IL-27 mRNA水平上的影響。
　　結(jié)果：⑴IL-27能夠促進(jìn)AA患者外周血中DC的增殖（without IL-27組OD值為0.3009±0.0091，with50ng/ml IL-27組OD值為0.3354±0.0077，n=8， P=0.012）；⑵IL-27能夠抑制AA患者外周血中DC的凋亡（without IL-2

5、7組凋亡率為51.750±2.454％，with50ng/mlIL-27組凋亡率為41.750±2.235％，n=12, P=0.006）；⑶IL-27可以上調(diào)AA患者外周血中DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)；⑷IL-27可以促進(jìn)AA患者外周血中DC分泌IL-12、IL-23、IL-27等細(xì)胞因子（without IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是29.000±1.042pg/ml、60.850±3.5

6、89pg/ml、38.580±1.018pg/ml，with50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是36.950±0.869 pg/ml、79.370±3.441 pg/ml、44.710±2.138 pg/ml，P值分別為0.000、0.005、0.003）；⑸IL-27可以促進(jìn)AA患者DC分泌的IL-12、IL-23、IL-27 mRNA表達(dá)（without IL-27組IL-12p35、IL-12

7、p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達(dá)量為1.000±0.071、1.000±0.073、1.000±0.050、1.000±0.073、1.000±0.069、1.000±0.063，with50ng/ml IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27E

8、BI3relative quantitive mRNA expression表達(dá)量分別為1.695±0.193、1.585±0.254、2.285±0.404、1.585±0.254、4.158±0.320、1.647±0.224，P值分別是0.009、0.037、0.024、0.037、0.000、0.035）；⑹不能證明IL-27促進(jìn)AA患者外周血中單核細(xì)胞的增殖（without IL-27組OD值為0.2238±0.0102，wi

9、th50ng/ml IL-27組OD值為0.2435±0.0116，n=10，P=0.218）；⑺IL-27能夠抑制AA患者外周血中單核細(xì)胞的凋亡（without IL-27組凋亡率為42.100±3.734％，with50ng/mlIL-27組凋亡率為27.560±2.328％，n=9, P=0.002）；⑻IL-27可以促進(jìn)AA患者外周血中單核細(xì)胞分泌IL-12、IL-23、IL-27等細(xì)胞因子（without IL-27組IL-1

10、2、IL-23、IL-27分泌量分別是25.210±1.591pg/ml、35.540±1.728pg/ml、26.690±1.133pg/ml，with50ng/ml IL-27組IL-12、IL-23、IL-27分泌量分別是31.660±1.032 pg/ml、43.620±2.353pg/ml、37.440±1.640 pg/ml，P值分別為0.007、0.020、0.000）；⑼IL-27可以促進(jìn)AA患者單核細(xì)胞內(nèi)IL-12、I

11、L-23、IL-27 mRNA表達(dá)（without IL-27組IL-12p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達(dá)量為1.000±0.082、1.000±0.075、1.000±0.067、1.000±0.075、1.000±0.061、1.000±0.069，with50ng/ml IL-27組IL-12

12、p35、IL-12p40、IL-23p19、IL-23p40、IL-27p28、IL-27EBI3relative quantitive mRNA expression表達(dá)量分別為1.546±0.164、1.780±0.148、1.598±0.151、1.780±0.148、4.114±0.307、2.209±0.340，P值分別是0.046、0.001、0.004、0.001、0.000、0.009）。
　　結(jié)論：IL-27可以