免疫抑制藥物對小鼠樹突狀細胞分化成熟的影響.pdf

1、目的：建立小鼠體外樹突狀細胞(DC)培養(yǎng)、擴增和獲取高純度不同成熟狀態(tài)樹突狀細胞的操作流程(OP)；同時觀察體外培養(yǎng)條件下，不同免疫抑制藥物單獨及聯(lián)合作用下對樹突狀細胞成熟狀態(tài)的影響。 方法：利用小鼠的骨髓細胞體外培養(yǎng)樹突狀細胞，將培養(yǎng)的樹突狀細胞分成六組：A組為對照組，培養(yǎng)過程中除添加細胞因子：重組小鼠粒細胞．巨噬細胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重組小鼠白細胞介素4(nIL-4)、重組小鼠腫瘤壞死因子a(rrTNF-α)

2、、重組小鼠Y干擾素(rrIFN-γ)外不添加任何藥物；B、C、D、E、F組為實驗組，除上述細胞因子外，在培養(yǎng)至第6天的樹突狀細胞中加入不同濃度的地塞米松(DEX)、環(huán)磷酰胺(CTX)、甲基強的松龍(MP)共同培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)變化，EIJSA法檢測各組培養(yǎng)上清中白細胞介素12(IL-12)的水平；同時用流式細胞儀檢測細胞共刺激分子CD80、CD86的表達水平。 結果： ①樹突狀細胞培養(yǎng)的情況：在倒置顯微鏡下觀察骨髓前體細

3、胞在培養(yǎng)板中的生長情況良好，細胞大量增殖； ②不同時期樹突狀細胞呈現(xiàn)不同的形態(tài)特征，到第6天收獲未成熟樹突狀細胞，此時加入rrTNF-α、rrIFN-γ，第9天收獲成熟樹突狀細胞。每2只小鼠的骨髓細胞可得到2-5×107個樹突狀細胞，完全能夠滿足實驗的要求； ③未加免疫抑制藥物組培養(yǎng)液上清中白細胞介素12的水平隨著培養(yǎng)天數的增加而升高，成熟組樹突狀細胞培養(yǎng)上清中白細胞介素12的水平高于未成熟組(P<0.05)；

4、④在加入免疫抑制藥物刺激后，成熟組樹突狀細胞培養(yǎng)上清中白細胞介素12的水平均低于對照組(P<0.05)； ⑤未加免疫抑制藥物組樹突狀細胞表面共刺激分子CD80及CD86表達水平隨著培養(yǎng)天數的增加而升高，成熟組樹突狀細胞表面共刺激分子CDS0及CD86表達水平均高于未成熟組(P<0.05)； ⑥用免疫抑制藥物處理過的DC，其表面共刺激分子CD80、CD86的表達水平較對照組有不同程度降低(P<0.05)，高濃度組CD80、

5、CD86的表達水平較低濃度組下降明顯(P<0.05)； ⑦單獨的DEX、CTX、和MP處理組的DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達水平降低和CTX+DEX組、CTX+MP組的DC的表達水平下降相近，兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 結論：本實驗成功地在體外培養(yǎng)擴增昆明鼠未成熟和成熟狀態(tài)的樹突狀細胞；不同免疫抑制藥物處理的DC分泌的白介素12的水平更低，提示可能可誘導反應向Th2型偏倚，使機體重新達到Th1