氧化苦參堿對小鼠樹突狀細胞成熟和功能的影響.pdf

1、【目的】研究氧化苦參堿對小鼠樹突狀細胞成熟、表型及功能的影響。 【方法與分組】采用細胞因子小鼠集落刺激因子(mGM-CSF)和白介素4(mIL-4)聯(lián)合方案體外誘導小鼠骨髓來源的樹突狀細胞(Dendritic Cell，DC)，并利用脂多糖(LPS)刺激樹突狀細胞的成熟。處理組分別于樹突狀細胞誘導培養(yǎng)的第0天和第5天添加終濃度為0.5mg/ml氧化苦參堿(OMT)，并于培養(yǎng)第7天收集細胞。實驗分組為A組：DC；B組：DC+OMT

2、(DO)；C組：DC+OMT(D5)；D組：DC+LPS；E組：DC+OMT(D0)+LPS；F組：DC+OMT(D5)+LPS；G組：T淋巴細胞對照組。 采用流式細胞術檢測DC表面分子CD40的表達；3H-TdR摻入細胞增殖反應檢測氧化苦參堿對樹突狀細胞的細胞毒作用和混合淋巴細胞反應(MLR)中樹突狀細胞對T淋巴細胞的刺激能力；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測MLR上清中IFN-γ的分泌水平。 【結果】

3、 1．3H-TdR細胞摻入試驗檢測氧化苦參堿對小鼠樹突狀細胞存活的抑制作用。結果氧化苦參堿在濃度為0.8 mg/ml時即表現(xiàn)出抑制小鼠樹突狀細胞的作用(P 0.05)，在1.0mg/ml-5.0mg/ml濃度范圍內，氧化苦參堿抑制樹突狀細胞增殖作用呈劑量依賴性，與對照組相比均具有顯著性差異(P 0.01)。 2．樹突狀細胞表面標志CD40的表達：①B組DC表面分子CD40的表達[(40.77±1.28)％]較之對照A組[(25.

4、93±7.85)％]顯著升高，有統(tǒng)計學意義(p<0.01)；C組DC表面分子CD40的表達[(26.40±4.85)％]較之對照A組，無統(tǒng)計學意義。②E組DC表面分子CD40的表達[(48.62±2.46)％]較之對照D組[(34.92±5.82)％]升高，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 3．混合淋巴細胞反應：①各組DC與T細胞以1:5、1:10和1:20比例混合時T細胞的增殖較T細胞對照組(即G組)均明顯增高(P0.05)；隨

5、混合比例增加，T細胞增殖也增高。②DC:T為1:5時，B組T細胞的增殖[(49094.67±3048.50)cpm]較之A組[(26628.67±4268.55)cpm]升高，有統(tǒng)計學意義(P 0.05)；C組[(27195.00±9607.25)cpm]較之對照A組無統(tǒng)計學差異。③E組T細胞的增殖[(149144.30±7212.92)cpm]較之對照D組[(120832.30±6825.45)cpm]升高，有統(tǒng)計學意義(P 0.05

6、)；F組[(89665.33±7420.14)cpm]較之對照D組無統(tǒng)計學差異。 4．細胞因子檢測：①各干預組較T細胞對照組上清中IFN-γ[(4.11±2.51)pg/ml]均有增高，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。②B組上清中IFN-γ[(181.84±33.16)pg/ml]較之對照A組[(100.88±8.51)pg/ml]高，有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，C組[(98.40±31.19)pg/ml]較之對照A組沒有統(tǒng)計學