Smad3基因剔除對(duì)小鼠造血功能和樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響.pdf

1、研究目的:1、研究Smad3基因剔除對(duì)小鼠造血功能的影響.2、Smad3基因剔除對(duì)小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響.研究方法:1、實(shí)驗(yàn)小鼠分為5組,每組有Smad3基因剔除小鼠(Smad3<'-/->)和其同窩孿生的野生型小鼠(Smad3<'+/+>)各一只.小鼠的造血功能用14天形成的脾結(jié)節(jié)(CFU-S<,14>)、多系祖細(xì)胞(CFU-GEMM)、粒-單系祖細(xì)胞(CFU-GM)、紅系祖細(xì)胞(BFU-E)測(cè)定及外周血象、骨髓象等實(shí)驗(yàn)血液學(xué)指標(biāo)來(lái)

2、確定.(1)體外實(shí)驗(yàn):每組小鼠取尾血作白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù),涂片作有核細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù).將一側(cè)股骨的骨髓沖出,制成單細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù)其中有核細(xì)胞數(shù),測(cè)定CFU-GM、BFU-E、CFU-GEMM值.(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將每只小鼠的4×10<'4>個(gè)骨髓有核細(xì)胞,經(jīng)尾靜脈注入3只8-10周經(jīng)致死量射線照射的同系雌性小鼠體內(nèi),測(cè)定14天的CFU-S.取一部分胸骨、肝臟、脾臟固定做病理切片, 其余胸骨沖出骨髓,涂片作分類(lèi)計(jì)數(shù).2、實(shí)驗(yàn)小鼠分組同上

3、,共用三組小鼠.(1)DC的誘導(dǎo):將小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞在1×10<'6>/ml濃度下,以10ng/ml GM-CSF和10ng/ml IL-4條件下誘導(dǎo)7-8天,再以1μg/ml LPS刺激成熟,收集懸浮和輕微貼壁的細(xì)胞,即為DC.(2)DC的鑒定及功能:對(duì)收集的DC進(jìn)行形態(tài)鑒定,用MTT法檢測(cè)其刺激異基因初始T細(xì)胞增殖的能力(異基因初始T細(xì)胞從8-10周齡Balb/c純系小鼠脾臟細(xì)胞經(jīng)尼龍毛柱分離純化而來(lái)),即混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR