曲古霉素A對(duì)小鼠骨髓源性樹突狀細(xì)胞表型和功能的影響.pdf

1、目的：未成熟樹突狀細(xì)胞（immature dendritic cells, imDCs）誘導(dǎo)免疫耐受的作用越來(lái)越受到重視，如何保持其未成熟狀態(tài)成為研究熱點(diǎn)。本文旨在研究曲古霉素A（Trichostatin A,TSA）對(duì)小鼠骨髓源性樹突狀細(xì)胞表型和功能的影響。
　　方法：取小鼠骨髓前體細(xì)胞，在含重組小鼠粒/巨細(xì)胞刺激因子（recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimula

2、ting factor, rmGM-CSF）和重組小鼠白介素-4（recombinant mouse interleukin4,rmIL-4）完全培養(yǎng)基中誘導(dǎo)其向DCs分化，于第6天收集疏松貼壁細(xì)胞分為4組：空白組（不添加任何藥物）、TSA組(加入100 ng/ml TSA)、LPS組（加入100 ng/ml LPS）、LPS+TSA組（分別加入上述藥物），繼續(xù)培養(yǎng)48h后收集細(xì)胞。倒置顯微鏡觀察不同時(shí)間段細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。收集上述4組誘

3、導(dǎo)培養(yǎng)至第8天疏松半貼壁細(xì)胞，PBS洗滌后調(diào)整細(xì)胞濃度5×106/ml，取100ul懸液加入流式試管中，加入FITC標(biāo)記CD86、CD80單克隆抗體各0.5ug，同型對(duì)照組分別加入相應(yīng)的同型對(duì)照抗體，4℃靜置避光30min,PBS再次洗滌后上流式細(xì)胞儀測(cè)定各組 DCs表面 CD86、CD80的表達(dá)情況?；旌狭馨图?xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)（MTT法）4組誘導(dǎo)培養(yǎng)至第8天的DCs對(duì)異基因T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響。ELISA檢測(cè)各組培養(yǎng)至第8天的細(xì)胞上

4、清液IL-12、IL-10分泌的變化。
　　結(jié)果：倒置顯微鏡觀察，剛開始前體細(xì)胞體積較小，呈圓形貼壁生長(zhǎng)。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，胞體增大，變成橢圓形或不規(guī)則，至第2天有少量DCs集落生成，第4天DCs集落增多、增大，繼續(xù)培養(yǎng)至第6天見DCs集落呈疏松貼壁懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)，集落周圍有樹突樣懸浮細(xì)胞出現(xiàn)，呈典型DCs形態(tài)；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示經(jīng)TSA處理后，DCs表面分子CD86、CD80表達(dá)均低于其它各組（P<0.05），尤其較LPS組降低

5、更明顯；混合淋巴增殖實(shí)驗(yàn)顯示TSA誘導(dǎo)的DCs顯著降低同種異基因T淋巴細(xì)胞增殖能力，提示DCs抗原提呈能力受損；ELISA檢測(cè)結(jié)果表明TSA能顯著提高樹突狀細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子IL-10（P<0.05），與此同時(shí)對(duì)Th1型細(xì)胞因子IL-12分泌量抑制顯著（P<0.05）。
　　結(jié)論：TSA能夠抑制樹突狀細(xì)胞的成熟和誘導(dǎo)未成熟樹突狀細(xì)胞的產(chǎn)生。該DCs不能被促炎因子激活，穩(wěn)定保持耐受性表型特征，因此其誘導(dǎo)的DCs在今后炎癥性疾病