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文檔簡介
1、目的：采用中藥黃芩苷（baicalin)改變體外培養(yǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell-D3)mES-D3微環(huán)境，探討黃芩苷對mES-D3定向分化為心肌樣細(xì)胞的影響。
方法：在無白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）存在的條件下，96孔板中體外培養(yǎng)mES-D3細(xì)胞8天，MTT法檢測不同濃度的黃芩苷對ES細(xì)胞增殖和活性的影響，篩選合適的濃度用于分化誘導(dǎo)。采用經(jīng)典的
2、“懸滴-懸浮-貼壁”三步法，用三種濃度的黃芩苷誘導(dǎo)ES細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；在不同貼壁時(shí)間點(diǎn)計(jì)數(shù)跳動(dòng)的EB（embryoid body）個(gè)數(shù)，計(jì)算跳動(dòng)EB的百分率；免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測心肌肌小節(jié)特異性α-輔肌動(dòng)蛋白（α-actinin）的表達(dá)；RT-PCR檢測心肌特異性α-肌球蛋白重鏈（α-MHC）的表達(dá)；用流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞分化比例。
結(jié)果: MTT結(jié)果顯示，1μmol/L，10μmol/
3、L，102μmol/L，103μmol/L的黃芩苷顯著抑制了mES-D3細(xì)胞的增殖，在所選濃度中10-1μmo/L的黃芩苷對細(xì)胞增殖的影響最小。通過對分化EB形態(tài)的觀察，我們發(fā)現(xiàn)中藥誘導(dǎo)組EB個(gè)數(shù)較空白組少，EB大小較空白組小，但是流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示1μmo/L黃芩苷組明顯提高了心肌樣細(xì)胞分化率。而且免疫細(xì)胞化學(xué)和RT-PCR分別檢測到α-actinin和α-MHC的表達(dá)。
結(jié)論：高濃度的黃芩苷顯著了抑制mES-D3細(xì)胞
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