泛素化抑制劑Thalidomide和PYR-41對(duì)樹突狀細(xì)胞抗原交叉提呈的作用研究.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells，DCs)是機(jī)體最為重要的抗原提呈細(xì)胞(Antigen presenting cell，APC)。DCs對(duì)抗原的交叉提呈是指外源性抗原被DCs攝取和加工后，與MHCⅠ類分子結(jié)合形成CD8+特異性抗原肽-MHCⅠ類分子復(fù)合物的過程，可使T細(xì)胞分化為CD8+特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞(Cytotoxic Tlymphocyte，CTL)。甘露糖受體(Mannose receptor, MR)是DCs表面重要

2、的的模式識(shí)別受體(Pattern recognition receptor, PRR)，DCs對(duì)可溶性抗原的交叉提呈依賴于MR介導(dǎo)的抗原內(nèi)吞及MR的泛素化修飾。但迄今為止，泛素化作用在DCs對(duì)抗原的交叉提呈中的研究尚少，為此，本課題以C57BL/6小鼠骨髓體外誘導(dǎo)的BM-DCs為研究對(duì)象，雞卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)為模式抗原，先通過Western blot驗(yàn)證負(fù)載抗原OVA后DCs胞內(nèi)蛋白的泛素化水平，然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢

3、測(cè)Thalidomide和PYR-41處理后DCs表面交叉提呈產(chǎn)物SIINFEKL-H2kb的產(chǎn)生;其次，使用激光共聚焦顯微鏡結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞表面Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)的表達(dá)變化后，進(jìn)一步觀察接頭蛋白MyD88在胞質(zhì)中的轉(zhuǎn)位。通過免疫印跡檢測(cè)Thalidomide和PYR-41是否影響NF-κB信號(hào)通路;同時(shí)也通過激光共聚焦顯微鏡觀察了吞噬抗原后p97、Sec61等在DCs中的分布。最

4、后通過BrdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、ELISA以及ELISPOT檢測(cè)其對(duì)DCs交叉致敏的影響。
　　結(jié)果顯示:(1)負(fù)載抗原OVA后，DCs胞內(nèi)蛋白的泛素化水平明顯上升;(2)Thalidomide和PYR-41預(yù)處理顯著降低SIINFEKL-H2kb的產(chǎn)生。(3)LPS能引起DCs表面TLR4內(nèi)吞并定位于早期內(nèi)體，而Thalidomide和PYR-41能減少TLR4、MyD88的內(nèi)體轉(zhuǎn)位。(4)Thalidomide和PYR-41抑制N