B7-H1基因沉默對結(jié)腸癌細胞生長的抑制作用和對CIK細胞殺傷活性的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名2受蜇日期：盤!：苧『占中國醫(yī)科

2、大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借闋。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文’論文

3、作者簽名：一指導(dǎo)教師簽名：盤2當(dāng)日中文論著摘要B7HI基因沉默對結(jié)腸癌細胞生長的抑制作用和對CIK細胞殺傷活性的影響目的了解腫瘤的免疫抑制機理、打破腫瘤免疫抑制是當(dāng)今腫瘤免疫治療的重要和前沿課題。B7H1／PD1是腫瘤細胞最主要的負性調(diào)節(jié)通路之一，B7H1作為共刺激分子B7家族成員在腫瘤細胞上表達，能夠通過受體(如PD1)誘導(dǎo)初始T細胞增殖，抑制已活化T細胞的增殖和分化，促使其凋亡；PD1在T細胞的活化后期表達。但是，此通路在腫瘤的發(fā)生

4、、發(fā)展的何時開始發(fā)揮作用，以及如何發(fā)揮作用，確切的機理仍然不清。CIK細胞是臨床上最為常用的免疫活性細胞，其中有沒有能夠避開B7H1／PD1抑制途徑的細胞亞群，或者通過怎樣的方法能夠解除這種抑制、增強CIK細胞的殺傷活性，仍然不明了，也未見相關(guān)的報道。方法采用免疫組織化學(xué)染色法檢測46例結(jié)腸癌、20例結(jié)腸腺瘤性息肉及28例結(jié)腸慢性炎癥患者組織中B7H1基因的表達，并與臨床資料比較，對其中46例結(jié)腸癌患者進行電話隨訪；應(yīng)用細胞免疫化學(xué)染色

5、法檢測4株結(jié)腸癌細胞及1株人臍靜脈內(nèi)皮細胞中B7H1蛋白水平的表達；針對B7H1設(shè)計合成RNA干擾片段，連接到pGenesil1U6載體上構(gòu)建shRNA真核表達載體；將上述重組載體轉(zhuǎn)入HCTI16細胞內(nèi)，應(yīng)用RTPCR、RealtimePCR及Westernblot方法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞內(nèi)B7HlmRNA和蛋白水平的表達抑制率；應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后腫瘤細胞周期的變化，同時對轉(zhuǎn)染前后的細胞連續(xù)培養(yǎng)7天，應(yīng)用MTT法繪制細胞生長曲線；選