HDAC抑制劑SAHA對骨肉瘤細(xì)胞分化誘導(dǎo)作用的研究.pdf

1、背景和目的:
　　 體外培養(yǎng)的骨肉瘤細(xì)胞株HOS細(xì)胞應(yīng)用分化誘導(dǎo)劑SAHA（Subcroylanilide hydroxamic acid）處理，觀察研究SAHA對骨肉瘤HOS細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用及在分化誘導(dǎo)過程中c-myc mRNA基因表達(dá)規(guī)律，初步探討其作用機(jī)理。
　　 材料與方法:
　　 取骨肉瘤細(xì)胞株HOS傳代細(xì)胞，將其分為對照組和SAHA（不同濃度：2.0、4.0、6.0、8.OuM）實驗組，接種12h后

2、，在倒置顯微鏡和透射電鏡下觀察，分析經(jīng)不同濃度SAHA處理后，HOS細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)變化；HOS細(xì)胞的細(xì)胞周期應(yīng)用流式細(xì)胞分析術(shù)（FCM）分析；應(yīng)用MTT比色法，測定經(jīng)不同濃度SAHA處理后，HOS細(xì)胞增殖的抑制情況；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測，經(jīng)不同濃度SAHA處理后，HOS細(xì)胞中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)的變化；應(yīng)用RT-PCR方法檢測不同濃度SAHA處理前后對HOS細(xì)胞中c-myc mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:

3、>　　 經(jīng)不同濃度SAHA處理后的HOS細(xì)胞在倒置顯微鏡和透射電鏡的觀察下，表現(xiàn)為細(xì)胞增殖速度隨SARA處理濃度的增加，增殖速度減慢逐漸增加，細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)為體積增大，細(xì)胞表面微絨毛減少，存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的高爾基體趨于典型，線粒體數(shù)量SAHA處理組較對照組增多，經(jīng)不同濃度SARA處理后線粒體嵴發(fā)達(dá)，細(xì)胞形態(tài)趨向于正常細(xì)胞而細(xì)胞核則有所減小，形狀逐漸趨于正常，核仁的數(shù)量明顯減少、且體積變小，核質(zhì)比例較對照組減小，細(xì)胞核內(nèi)常染色質(zhì)明顯增多而異

4、染色質(zhì)相對減少，；MTT比色法測定結(jié)果顯示經(jīng)不同濃度（2.0、4.0、6.0、8.0uM）SAHA處理后，HOS細(xì)胞的增殖均受到不同程度的抑制，并絕大部分被阻滯于G0/G1期；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測顯示SARA處理組PCNA在HOS細(xì)胞中的表達(dá)水平均有降低；流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，不同濃度SARA處理后HOS細(xì)胞絕大部分被阻滯于G0/G1期， S期細(xì)胞較對照組則顯著減少，；應(yīng)用RT-PCR方法測定c-myc mRNA的表達(dá)水平，顯示SAHA處

5、理組較對照組表達(dá)水平明顯降低，降低的水平與HOS細(xì)胞受到抑制的程度具有一定的相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 經(jīng)SAHA處理后，HOS細(xì)胞的惡性增殖活動得到了有效的抑制，結(jié)果表明SAHA對人骨肉瘤細(xì)胞具有顯著的誘導(dǎo)分化及凋亡的作用，這種作用隨SAHA濃度的增加和處理時間的延長而增強(qiáng)；對其機(jī)理進(jìn)行初步探討，可能與SAHA能抑制組蛋白去乙?；福℉DAC）的活性，從而使c-myc mRNA的表達(dá)水平下調(diào)，使骨肉瘤細(xì)胞的惡行增殖活