γ-分泌酶抑制劑對耐雷帕霉素人成骨肉瘤細胞增殖、侵襲及凋亡的影響.pdf

1、目的：通過研究γ-分泌酶抑制劑(DAPT)、雷帕霉素（RAPA）對骨肉瘤細胞株增殖、侵襲及凋亡的影響,初步研究DAPT對骨肉瘤細胞耐藥逆轉可能性，探討在骨肉瘤多藥耐藥機制中mTOR通路、Notch通路與相關影響因素的聯(lián)系。
　　方法：體外建立培養(yǎng)耐RAPA骨肉瘤MG-63細胞株；噻唑藍(MTT)比色法檢測耐RAPA骨肉瘤MG-63細胞株的耐藥指數(shù)，測定不同濃度的RAPA、DAPT對2種細胞株增殖影響;劃痕試驗測定2種細胞株的遷移能

2、力；Transwell法檢測骨肉瘤MG-63細胞的侵襲能力，對比2種藥物干預下各細胞株侵襲過程中遷移率的差異；Annexin V-FITC/PI聯(lián)合流式細胞儀測定不同藥物對2種細胞株凋亡的影響;Western blot法檢測不同藥物作用下各細胞株中p53蛋白的表達。
　　結果：MTT結果顯示RAPA及DAPT均能抑制2種細胞株的增殖。Transwell結果表明2種細胞株在不同濃度藥物作用下遷移率出現(xiàn)明顯差異。流式檢測凋亡發(fā)現(xiàn)RAP

3、A、DAPT均能誘導2種細胞株細胞發(fā)生凋亡,骨肉瘤MG-63細胞早、晚期凋亡率均與藥物干預劑量呈正比,而實驗組耐雷帕霉素MG-63細胞與空白對照組細胞比較，僅在高劑量藥物作用下,早、晚期凋亡率差異存在統(tǒng)計學意義。Western blot檢測結果表明,在不同濃度RAPA、DAPT藥物作用下,2種細胞株中p53表達量存在差異，骨肉瘤MG-63細胞p53表達量呈藥物劑量依賴性,而耐雷帕霉素MG63細胞p53的表達量則未隨藥物濃度升高而明顯增加