嗜酸乳桿菌等胃內(nèi)常居菌群與幽門螺桿菌致病作用的相關(guān)性研究.pdf

1、自澳大利亞學(xué)者Warren和Marshall首次從人胃黏膜發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp),并證實(shí)Hp與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃粘膜相關(guān)性淋巴瘤、胃癌等疾病之間有著非常密切的關(guān)系以來,經(jīng)過大量的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)和流行病學(xué)調(diào)查后,目前的主流觀點(diǎn)認(rèn)為Hp是一種致病菌,抑殺He成為臨床醫(yī)生治療Hp感染及相關(guān)疾病的基本原則。但是,抗Hp治療仍存在許多問題,諸如治愈率不高、復(fù)發(fā)率和耐藥性增高,在Hp感染與宿主胃部疾病的關(guān)系上

2、仍有較多的謎團(tuán)尚未解開。
　　 流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,Hp的發(fā)病率與感染率不一致。發(fā)達(dá)國家人群中Hp的感染率達(dá)25％-50％,發(fā)展中國家更是高達(dá)70-90％,而Hp相關(guān)性疾病的發(fā)病率卻遠(yuǎn)低于該數(shù)字,感染Hp的人常常無任何癥狀。面對(duì)這些Hp攜帶者,為何感染后臨床表現(xiàn)各異?是否需要抗菌治療?如何治療?對(duì)于這些問題目前尚無定論。用抗生素治療Hp感染的根除率達(dá)到80％-90％,但在普遍根除Hp的情況下,慢性胃炎、消化性潰瘍、胃粘膜相關(guān)性

3、淋巴瘤和胃癌的發(fā)病率并不減少,為何對(duì)Hp的根除治療并不能使胃疾病的發(fā)病率減少或痊愈?顯然,將幽門螺桿菌感染作為消化性疾病唯一的致病因素進(jìn)行研究是不全面的。幽門螺桿菌作為一種條件致病菌在消化性疾病中發(fā)揮作用的觀點(diǎn)也正慢慢得到認(rèn)同。因?yàn)镠p在胃粘膜的感染是一個(gè)復(fù)雜的過程,受多種因素影響,諸如胃部微環(huán)境、應(yīng)激、宿主的遺傳背景、菌株菌型毒力等。目前,更多研究開始重點(diǎn)關(guān)注宿主因素和幽門螺桿菌的關(guān)系,特別是胃內(nèi)菌群因素所起的作用。
　　 用

4、各種動(dòng)物制備Hp感染性疾病模型時(shí)人們發(fā)現(xiàn),用無菌動(dòng)物或免疫缺陷動(dòng)物、SPF級(jí)BALB/c鼠等動(dòng)物體內(nèi),Hp較易定植并引起Hp相關(guān)疾病,而在普通動(dòng)物體內(nèi),Hp卻較難定植,更進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),胃內(nèi)優(yōu)勢菌為乳桿菌的普通小鼠,可明顯拮抗Hp定植,在胃部菌群失調(diào)時(shí)Hp才能由劣勢菌變?yōu)閮?yōu)勢菌導(dǎo)致胃部疾病的發(fā)生。以上研究均提示Hp在動(dòng)物體內(nèi)的定植與動(dòng)物胃內(nèi)的菌群狀態(tài)關(guān)系密切,胃內(nèi)微生態(tài)影響著Hp的定植及Hp相關(guān)疾病的發(fā)生。但人體胃內(nèi)菌群與Hp感染的關(guān)系

5、尚未見研究報(bào)道。
　　 Hp在胃內(nèi)定植但并不意味著致病,只要其生長受到正常優(yōu)勢菌的抑制,Hp導(dǎo)致的相關(guān)疾病便不會(huì)發(fā)生,因此感染率與發(fā)病率自然會(huì)不一致。既然Hp是條件致病菌,預(yù)期將治療重點(diǎn)放在用抗生素等治療方法根除Hp上,不如將治療重點(diǎn)放在重建胃內(nèi)正常微生態(tài)環(huán)境、抑制Hp生長從而治療Hp相關(guān)疾病上。因?yàn)橛每股刂委煏r(shí),殺滅的不僅是Hp,還包括胃內(nèi)的正常菌群,相當(dāng)于更進(jìn)一步破壞了胃內(nèi)微生態(tài)環(huán)境,這就為細(xì)菌的二重感染和Hp感染的復(fù)發(fā)提

6、供了良好的環(huán)境。如果能夠重建并保持胃內(nèi)微生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定,則可長期抑制Hp生長,預(yù)防Hp相關(guān)疾病的發(fā)生,還可避免Hp感染復(fù)發(fā)的問題。
　　 如果能從微生態(tài)的角度著手,探明胃內(nèi)菌群與Hp相關(guān)疾病的關(guān)系,并從中篩選到一株對(duì)Hp有較好抑制作用的菌株,這將為益生菌治療胃部疾病提供更多的治療選擇。
　　 研究目的
　　 1.通過對(duì)不同Hp感染狀態(tài)人群的胃內(nèi)菌群的檢測分析,探明胃內(nèi)主要菌群的結(jié)構(gòu)組成以及和Hp感染的相關(guān)性。

7、>　　 2.通過對(duì)嗜酸乳桿菌臨床分離優(yōu)勢菌株的大量篩選,并通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,獲得一株對(duì)Hp有較好抑制作用的菌株,為進(jìn)一步開發(fā)治療Hp微生態(tài)制劑奠定基礎(chǔ)。
　　 研究方法
　　 1.Hp陰性者、Hp正常攜帶者、Hp感染患者胃內(nèi)菌群的分離培養(yǎng)及鑒定
　　 將進(jìn)行胃鏡檢查的患者的胃粘膜活檢組織勻漿,分別接種于腦心浸液血瓊脂平板、厭氧菌瓊脂平板、MRS、COBA、伊紅美藍(lán)瓊脂平板、沙氏瓊脂平板上,分別于厭氧、微需氧、

8、有氧環(huán)境中37℃培養(yǎng)1-2d,并對(duì)特異性菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢和生化鑒定,確定每一種屬細(xì)菌的定植率及菌群比例,并結(jié)合病人胃部病理學(xué)改變和Hp感染狀態(tài),確定菌群結(jié)構(gòu)與Hp感染的相關(guān)性。
　　 2.嗜酸乳桿菌優(yōu)勢菌株的篩選及其拮抗幽門螺桿菌的體外抑制試驗(yàn)
　　 將從人體胃內(nèi)分離培養(yǎng)出的、經(jīng)鑒定后為乳桿菌的菌落接種在pH3的酸性MRS培養(yǎng)基上,37℃,厭氧環(huán)境培養(yǎng)2d,對(duì)平板上生長的菌落進(jìn)行生化鑒定確定為嗜酸乳桿菌后,通過平板打

9、孔法進(jìn)行體外抗Hp的抑菌試驗(yàn),根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小來判斷抑菌效果;再將對(duì)Hp抑制作用最強(qiáng)的嗜酸乳桿菌菌株進(jìn)行耐酸、耐膽汁試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)。
　　 3.BALB/c小鼠感染Hp模型的建立及JK57體內(nèi)治療Hp感染的有效性研究
　　 利用前期篩選到的具有較強(qiáng)Hp抑制效果的嗜酸乳桿菌JK57進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。選用BALB/c小鼠,隨機(jī)分為6組,包括正常對(duì)照組、Hp感染模型對(duì)照組、JK57治療組、JK57+PPI藥物治療組、保加利亞

10、乳桿菌治療對(duì)照組、抗生素+PPI藥物治療對(duì)照組。分別按常規(guī)法對(duì)除正常組外的小鼠進(jìn)行Hp感染攻毒,建立感染模型,感染3周后建模成功后,分別進(jìn)行相應(yīng)的乳桿菌或抗生素處理,治療后2周,宰殺BALB/c小鼠,收集胃組織標(biāo)本,行快速尿素酶、細(xì)菌培養(yǎng)、PCR方法檢測Hp感染率和清除率,同時(shí),對(duì)胃粘膜組織進(jìn)行病理學(xué)組織檢查,利用選擇性培養(yǎng)法檢測胃內(nèi)主要菌群的定植數(shù)量變化,觀察補(bǔ)充益生菌后胃內(nèi)正常菌群的改變和胃內(nèi)微生態(tài)重建的效果。
　　 主要結(jié)

11、論
　　 1.對(duì)Hp陰性者、Hp攜帶者、Hp陽性患者胃內(nèi)菌群進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)不同人群胃內(nèi)菌群有顯著差異,Hp感染患者胃內(nèi)定植的乳桿菌數(shù)量要顯著低于健康人群,厭氧菌數(shù)量卻顯著增高,其余細(xì)菌也有不同程度的減少;這表明胃內(nèi)細(xì)菌數(shù)量與Hp,定植有密切關(guān)系。
　　 2.從卻健康攜帶者胃內(nèi)分離的嗜酸乳桿菌菌株經(jīng)過體外與Hp拮抗試驗(yàn),篩選
　　 到一株對(duì)Hp有明顯拮抗效果的嗜酸乳桿菌菌株JK57,對(duì)其他致病菌也有良好拮抗作用,有