槐花多糖對(duì)水貂肺炎克雷伯氏菌滅活疫苗的免疫增強(qiáng)效果的研究.pdf

1、肺炎克雷伯氏菌是一種條件致病菌，過去人們認(rèn)為其對(duì)畜禽的危害不大，故一直未引起人們足夠的重視。但是近年來(lái)關(guān)于肺炎克雷伯氏菌引起水貂等毛皮動(dòng)物疾病的報(bào)道卻在迅速增加，加之各種抗菌藥物的廣泛使用，導(dǎo)致該菌的耐藥性越來(lái)越強(qiáng)，且多重耐藥菌株大量出現(xiàn)，肺炎克雷伯氏菌病在水貂等毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中的危害越來(lái)越嚴(yán)重，因此隨著環(huán)境的改變，肺炎克雷伯氏菌作為人畜共患傳染病的病原，應(yīng)引起大家的廣泛重視。由于目前市場(chǎng)上尚沒有有效的肺炎克雷伯氏菌疫苗用于該病的防治，

2、致使該病得不到合理有效的防治，嚴(yán)重制約著水貂等毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此本研究擬以槐花多糖、弗氏佐劑等為免疫佐劑，制備了不同佐劑的肺炎克雷伯氏菌滅活疫苗，為肺炎克雷伯氏菌的免疫防控提供新的技術(shù)支撐及理論依據(jù)。
　　1.山東部分地區(qū)水貂肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定
　　為確診近兩年造成水貂死亡的主要細(xì)菌性病原，本研究在流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，對(duì)新鮮病死水貂進(jìn)行臨床癥狀觀察、病理學(xué)檢查，同時(shí)取病變組織肝、肺、氣管為材料分離純化細(xì)菌，對(duì)

3、所分離的細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)特征、理化特性檢查、藥敏試驗(yàn)和16S rRNA基因的分子鑒定。結(jié)果顯示，從剖檢病死水貂的肺、肝、氣管組織等均檢出同種細(xì)菌，生化特性相似，分離菌株對(duì)頭孢曲松鈉和阿米卡星敏感，綜合分析，該分離菌株為克雷伯氏菌屬的肺炎克雷伯氏菌。
　　2.槐花多糖對(duì)肺炎克雷伯氏菌滅活疫苗免疫增強(qiáng)效果的研究
　　依照本實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)的水提醇沉法提取槐花多糖，并將甲醛滅活的肺炎克雷伯氏菌與槐花多糖或弗氏不完全佐劑等體積配比制備疫苗。將

4、160只清潔級(jí)昆明小白鼠（雌性）隨機(jī)分為4組，于3、7、12天時(shí)，每組每只小白鼠分別注射等量的槐花多糖佐劑肺炎克雷伯氏菌滅活疫苗、弗氏佐劑肺炎克雷伯氏菌滅活疫苗、全菌體滅活疫苗和PBS。在首次免疫后的第7、14、21、28、35、42、49天每組隨機(jī)選取3只小白鼠采血檢測(cè)其血清抗體效價(jià)、白細(xì)胞介素-2（IL-2）含量、白細(xì)胞介素-4（IL-4）含量，外周血CD4+和CD8+ T淋巴細(xì)胞數(shù)量水平。同時(shí)，在首次免疫后的14天每組隨機(jī)選取20