uPAR反義RNA表達(dá)質(zhì)粒對(duì)大鼠RA滑膜ECM影響的初步研究.pdf

1、目的：探討反義uPAR/pcDNA3.1(-)真核表達(dá)質(zhì)粒對(duì)膠原型大鼠滑膜細(xì)胞外基質(zhì)的影響。 方法：①pcDNA3.1(-)質(zhì)粒及反義uPAR/pcDNA3.1(-)質(zhì)粒：采用堿裂解法從細(xì)菌保存液中大量抽提pcDNA3.1(-)質(zhì)粒及反義uPAR/pcDNA3.1(-)質(zhì)粒。②Wistar雌性大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，為正常對(duì)照組、造模對(duì)照組、生理鹽水治療組、空質(zhì)粒治療組、重組質(zhì)粒治療。正常對(duì)照組不做任何處理，其余4

2、組建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的大鼠類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型，15日后，生理鹽水治療組、空質(zhì)粒治療組、重組質(zhì)粒治療組，左踝關(guān)節(jié)內(nèi)分別注射生理鹽水、pcDNA3.1(-)質(zhì)粒及反義uPAR/pcDNA3.1(-)質(zhì)粒注射各50ul。③結(jié)果觀察：觀察大鼠的一般情況、關(guān)節(jié)炎指數(shù)，病理變化及免疫組化法檢測(cè)踝關(guān)節(jié)滑膜uPAR、MMP-3的表達(dá)。 結(jié)果：⑴回收質(zhì)粒DNA抽提質(zhì)粒后1％瓊脂糖凝膠電泳，在DNA Marker5400 bp附近可見(jiàn)明顯條

3、帶，與目的片段大小相符，用全自動(dòng)紫外分光光度計(jì)作濃度、純度測(cè)定，經(jīng)測(cè)定質(zhì)粒濃度510ng/ul、500ng/ul、質(zhì)粒DNA OD=260/280，在1.9-2.0之間。⑵隨著CIA免疫時(shí)間的延長(zhǎng)，造模對(duì)照組、生理鹽水治療組、空質(zhì)粒治療組關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分漸增加迅速，而重組質(zhì)粒治療組關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分增加緩慢；與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠滑膜，滑膜輕度增厚，滑膜新生血管開(kāi)始增多，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、增生。⑶免疫組化顯示：uPAR的表達(dá)：正常組大鼠

4、滑膜組織中無(wú)表達(dá)，模型對(duì)照組、生理鹽水組及空質(zhì)粒組之間無(wú)差異（p>0.05），模型對(duì)照組、生理鹽水組、空質(zhì)粒組與重組質(zhì)粒治療組之間有顯著差異（p<0.01）；MMP-3的表達(dá)：正常大鼠滑膜組織中無(wú)表達(dá)，模型對(duì)照組、生理鹽水組及空質(zhì)粒組之間無(wú)差異（p>0.05），模型對(duì)照組與重組質(zhì)粒治療組之間有顯著差異（p<0.01）。滑膜組織中uPAR、MMP-3相關(guān)性分析呈正相關(guān)（r=0.604，P<0.01）。 結(jié)論：①u(mài)PAR/pcDNA