pegfpc1-upar重組質(zhì)粒的構(gòu)建及對(duì)細(xì)胞增殖和侵襲性的影響

1、1 9 2 8第 2 7卷第 1 9期 第 三 軍 醫(yī) 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) V o 1 ．2 7 ， N o -1 92 0 0 5年 1 0月 A C T AA C A D E MI A EME D I C I N A EMI L I T A R I ST E R T I A EO c t ．2 0 0 5論 著 文 章 編 號(hào) ： 1 0 0 0 — 5 4 0 4 ( 2 0 0 5 ) 1 9 - 1 9 2 8 - 0 3

2、p E G F P C 1 - u P A R重組質(zhì)粒 的構(gòu)建及對(duì)細(xì)胞增殖和侵襲性 的影響 高強(qiáng) 國(guó)， 符 剛 ， 曾益 軍 ， 楊 恬 ( 第 t 軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部細(xì)胞生物學(xué)教研室， 重慶 4 0 0 0 3 8 )提 要 ： 日的 構(gòu)建 含人 u P A R叢 片斷 的真核表達(dá)綠 色熒光蛋 白質(zhì) 粒 ， 并 進(jìn)行初 步的細(xì)胞 生物學(xué)研 究。方法 設(shè) 計(jì)引物 ， 利用 P C R從原核表達(dá)質(zhì)粒 · f擴(kuò)增人全長(zhǎng) u P

3、A R基因 ， 并導(dǎo) 人真核 表達(dá)載體綠 色熒光蛋 白質(zhì)粒 p G F P C I中 ， 測(cè)序 確 認(rèn)后轉(zhuǎn)染 P a m2 1 2細(xì)胞 ， 使之在細(xì)胞 · I · 表達(dá) ， 檢測(cè)其細(xì)胞生長(zhǎng)特性和侵襲能力 的變化 。結(jié)果 測(cè) 序證 實(shí)構(gòu) 建的含 u P A R的綠色熒光蛋 r J 質(zhì)粒 ， 其 u P A Rc D N A閱瀆榧 完整 ， 連接部位序列正確 ； 轉(zhuǎn)染 P a m2 1 2 細(xì)胞后 ， 能促進(jìn) 細(xì)胞 的生

4、長(zhǎng)并能增 強(qiáng)細(xì) 胞 的侵襲能力 。結(jié)論 成功構(gòu)建 了含 p E G F P C I - u P A R質(zhì)粒 ， 確認(rèn) u P A R能促進(jìn) P a m2 1 2 細(xì)胞 的生長(zhǎng) 和侵 襲 ， 為進(jìn)一步在體 定位研究打下 了基礎(chǔ) 。關(guān)鍵詞 ： u P A R； p E G F P C I ；P a r e2 1 2細(xì)胞 中圖法分類號(hào) ：R 3 2 9 ． 2 8 ； R 3 9 4 - 3 3 ；R 3 9 4 ． 2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ：ACo

5、n s t r u c t i o na n de x p r e s s i o no fr e c o mb i n a n tp l a s mi dp EGF PC1 - u P AR i nP a m 2 1 2c e l l sG A OQ i a n g - g u o ， F UG a n g ， Z E N GY ij u n ， Y A N GT i a n( D e p a r t m e n to fC e

6、l lB i o l o g y ， C o l l e g eo fM e d i c a n e ， T h i r dM i l i t a r yM e d i c a lU n i v e r s i t y ， C h o n g q i n g4 0 0 0 3 8 ， C h i n a )Ab s t r a c t ：O b j e c t i v eT oc o n s t r u c tt h ee u k a

7、r y o t i ee x p r e s s i o np l a s mi do fp E G F P C1 ． u P A Rg e n ea n de x ．p l o r et h ee f f e c to nt h ep r o l i f e r a t i o na n di n v a s i o na b i l i t yo fP a m 2 1 2c e l l s ． Me t h o d sT h eh

8、 u ma nu P ARc DNAwa sc l o n e db yP C R．a(chǎn) n di n s e r t e di n t ot h ee u k a r y o t i ee x p r e s s i o np l a s mi dp E GF P C 1 ． A f t e ri d e n t i f i c a t i o no fs e ．q u e n c i n g ，t h er e c o n s t r

9、 u c t i v ep l a s mi dw a st r a n s f o r me dt r a n s i e n t l yi n t oP a m 2 1 2c e l l s ，t h e nt h ec e l lg r o w t ha n dt h ei n v a s i o na b i l i t yw e r ee v a l u a t e d ． Re s u l t sT h er e c o

10、n s t r u c t i v ep l a s mi do fp E GF P C 1 - u P A Rw a sv a l i d a t e db ys e q u e n c i n g ．T h er e c o n s t r u c t i v ep l a s mi dc a np r o mo t et h eg r o w t ho fP a m212c e l l sa n de n h a n c et h

11、 ei n v a s i o na b i l ．i t y ．Co n c l u s i o nT h ep E GF P C1 - u P ARp l a s mi dw a sc o n s t r u c t e ds u c c e s s f u l l ya n du P ARw a sc o n f i r m e dt op r o ． ．mo t et h eg r o wt ha n dt h ei n v a

12、 s i o na b i l i t yo fP a m 212c e l l s ，wh i c hl a yt h ef o u n d a t i o nf o rf u r t h e rs t u d i e so fu P ARi nv i v oKe ywo r d s ：h u ma nu P AR；p EGF P C1 ：P a m 2 1 2c e l l su P A R ( 尿激酶受體 ) 是一個(gè) 高度糖基

13、化 的( 5 5～6 0 ) X1 0的蛋 白質(zhì) ， 由 3個(gè) 同源性 的結(jié)構(gòu)域組成 ， 并 通過(guò) G P I 錨定的方式固定在質(zhì)膜上。以往對(duì)尿激酶系統(tǒng)主要側(cè)重于對(duì) u P A( 尿激酶 ) 的研究 ， u P A R僅僅看 作為 u P A的受體。但近來(lái)的研究表 明， u P A R不僅起 著受體的作用 ， 而且作為信號(hào)分子， 在細(xì)胞的遷移 、 粘 附、 分化以及增殖中起著重要的作用。基金項(xiàng) 目： 國(guó)家 自然科學(xué) 基金資助項(xiàng) } j

14、( 3 0 2 7 0 6 7 I ． 3 0 3 7 I 3 8 3 )S u p p o r l e db yl h eNa l i o n a lNa l u r a lS c i t · | lF o u n d a l i o no fCh i n( 3 0 2 7 0 6 7 1 ， 3 0 3 7 I 3 8 3)作者簡(jiǎn)介 ： 高強(qiáng)國(guó) ( 1 9 7 1 -) ， 男， 河北省平¨ I 縣 人． 博 l

15、 ‘ 研究 生， 講 師 ． 主要 從 事上皮生物學(xué)方面的研究 ：電話 ： ( 0 2 3 ) 6 8 7 5 2 2 5 9通訊作者 ： 楊 恬 ， 電話 ： ( 0 2 3 ) 6 8 7 5 2 2 6 0 ． E - m a i l ： t i a n y @1 6 3 ． n e t收稿 日期 ： 2 0 0 5 - 0 4 - 2 1 ： 修 回日期 ： 2 0 0 5 ． 0 6 ． 2 3綠色熒光蛋白能夠在紫外光的激發(fā)下

16、發(fā) 出明亮的綠色熒光 ， 蛋 白本身的性質(zhì)穩(wěn)定 ， 可在多種異源生物中表達(dá)， 無(wú)細(xì)胞毒性。因此 ， 綠色熒光蛋 白被作為一種新 型 的報(bào)告 基 因 ， 廣 泛用 于 研 究 某特 定基 因在 活 體 條件 下的表達(dá)情況 ， 細(xì)胞 內(nèi)的定位及功能分析。本研究將 u P A Rc D N A片斷構(gòu)建 到綠色熒光蛋 白質(zhì)粒 中， 并轉(zhuǎn)染 P a m2 1 2細(xì)胞 ， 研究對(duì)細(xì)胞基本特性的影響， 為進(jìn)一步進(jìn)行在體定位研究及探索 u P A R的

17、功 能 打下基 礎(chǔ) 。1 材料 與方 法 1 ． 1材料 人原核表達(dá)質(zhì)粒 p G E M - u P A R由北京軍科院賀福初院士惠 贈(zèng)。核酸內(nèi)切酶購(gòu) 自紐英倫生物技 術(shù)有限公 司 ， D N Am a r k e r 為 維普資訊 http://www.cqvip.com I ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．

18、． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． 一目 3 特 p E GlI ’ ?IlH粒 p ar e2 I 29 圊《m ! ⅢI lFP u m ： ‘ 1L “ k 'n “ { m p- F1u^up l ∞ mm 『I ?I 】Dr ?¨¨ ，-I _¨ ¨)! ． 3席

19、 枉 轉(zhuǎn) 染 時(shí) }胞 生 長(zhǎng) 能 力 的 昔 ； 響 1 ， 砸}轉(zhuǎn)誰(shuí) 咆 ’ j 牝轉(zhuǎn) m ¨．¨ 、 譴慢 “化 {T , I^綁 _ 胞 El#圳 胞 轉(zhuǎn) l 胞 增 仿牢 I吡【 { f 4· ， J <” 【 ”i i i I IL? ?21 2目p E G F P 【 Iu P A R粗轉(zhuǎn)對(duì) P 日 T _ 12 I 2胞生長(zhǎng)的影F ' l g4E f l~ c l&#

20、183; · rp EGFI ’ tlu P AI ． tn n I ' a m 2 1 2c e l l ~ r o wt h24 席 柱 特 囊 對(duì) 細(xì) 胞 侵 襲 能 的 蒂 j 響 如確 ·u2 l 2咆 舊佳 箍k址 n、P ^ Rl拽 J 出鞍 rl l 【 J ¨J IL ： 『 _ u P A I ~ 特 t 卸 l牛 晴粒 帥 瞳黃能 ， J轉(zhuǎn) l I l J A I IP ；

21、 ir l l2 I2眥 寄 譴 帕呲 教(± 4) 島 j壯卦 兀 胞( 6 3±) 峻轉(zhuǎn) 卒廄 帕 幛 I “)2I f( ¨ o l _ 矗叫 ． P A l e 能 進(jìn) I ' u ． iI 2n 々舞山3 討 論 利 [ I I 鷹粒轉(zhuǎn)啦鯽 咝戒 世 { T 轉(zhuǎn) 堆扎 糊 吶研 有多報(bào) 時(shí)． 拙 術(shù) Ⅱ 土 比較 JE 熟 蛛 也壇圮蛋 r 1 什種新 的報(bào) 旨 ． 詘 認(rèn)為址f _

22、1 f? 選洲拱 仆化豫 ¨ 胞探 螗 ” 池 以 ．I報(bào) ‘ r 坫 土 被仆 I l 『 】 【 。 lHl』 特_： I - 隨 洲 他 ． 刮f lF I 胞喊 l¨ if l『 披九 ! 【做 鏡 『蚍 察 !f僻哳 仙 r挺 圮缸激 ’觀察 ， 1 、 l 】披” f n) fm l 廿 ^l 巾Lf 、{ 芘 F ' I ’ 州 ，斂 fI 【 f 1 川 九】耐2． 能 州乏 kl 1

23、 l f — i jt ． c [ i¨1 ?！?J主川 』址 ff i - Ii ．【 JL I 1 l t1 -I 』 血? 1 、殳陸lI洲． 川l I 上J 胞JJE 轉(zhuǎn) } 虹rt 托I 土JJ ' [ “ J I i 1 # 1 1J 胞 ¨Ⅱ牡 刨愈“肢戊化 ，njL；J山lL I I ' A I I地木世 j起作 為 - I I ’ ^n J J_ j， 地 世- - l ’ A

24、¨一臺(tái)化活r的r 潴 船Ji帕纖潴嗍 ． 從』 l 起 一系州的 匣Jt ．什解胞外 蜒崾 I的m II 匝 激一ll 尢i ' l ! jJ l L 匝 盒屬I(mǎi)I 腳 瀚 或件被釁1K1 q，ll ： 體 內(nèi)外 1 ' 1 9 宜端 l ¨ ． ． 圳胞 行 IL I I ” 啞世 u l^I I }} 臺(tái)．雌化纖 溶酶脲轉(zhuǎn) 業(yè)成纖{ 棄 腑的能J 挺 島2 0 俯 i州- ¨ l

25、J ^ I { 作 為細(xì)兆 吶 價(jià)舒]， 磬 J jr 州啦 遷 棒附 ． 仔化姒 幢塒 吼等”在 忡衙 療而 ，滴過(guò)州 L l I ' A R ． 擱0u lAJu l ’ A l { 帥納 f } ． 從而 選 剖 抑 細(xì)胞晌 旺穆 “如州 。 究 ， J 、 ， 轉(zhuǎn) 槊 u l ’ A的 小心鱗狀 H 胞墑 ”2 1 2細(xì)胞 林． 比 求轉(zhuǎn) 染釧胞 質(zhì)牲轉(zhuǎn)染 細(xì)胞的增 蚶 牢』 5 1 ， 從一 個(gè)力盯 l 』酏 u

26、j j - u P A N參J細(xì) 胞} [I 旺 忙 『 , ； j l 1 ． J ， 轉(zhuǎn) 染的胞 比術(shù) 轉(zhuǎn) f I ! J ~ j lT 胞 和空質(zhì) 粒 轉(zhuǎn) 染I ' 1 9 ~ ' I I 胞掛 藿半增強(qiáng) J- - f 能n 0 娘 田． 挫通過(guò)j 常加 u l ’ Ai i l ’ A I { 岫 1 = ¨ 互 作川增烈 JJ e 經(jīng)裝能 力螽矩 力址}蜊 胞曲 主特1 l 1 =寅驗(yàn) 糶喪明， 通

27、世訃徘 性 u P A R 的』 J ¨ ^． 能促進(jìn)腫癍緗 啦的陵裝罐 n參考 文獻(xiàn) ：iⅡ銷¨ 邪拋非 、 | I： I I ：H『 【 版I ~ ~ 9 6JH ^ I 8 72Id #№晰 _ ¨ 12F (¨ _ m ? A鹽 瓜牲 帕尚J 1 ¨ c I {啦 林 F } 妓 』 、} 々 In¨M H3{ l1 ． 6 56【 l 1LⅥjI l ll j J

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29、l2) II 7 ( I5H? ? ㈨ Pu I ． A Hdw ¨ ¨ lJr?l In 】IJNJ 1 ln“ 1_ lI I n ~ l ，I 啦 i l 1：1In? IⅧ I ‘^I山 J山 J I _。 ' l ' ㈨ i I ～ | 】 - 【 i n u l l i l uE ~ t． a l ? l ‘J l l ㈨1?！? ? 『． ? I { m4‘ IJl ： lJr