重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染.pdf

1、目的:體外構(gòu)建腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)的重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF載體;利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中;嘗試?yán)眉{米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中。
　　方法:在人睪丸組織中提取RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后進(jìn)行高保真PCR擴(kuò)增得到腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，將其克隆入T載體和真核表達(dá)載體EGFP-N1中，通過菌落PCR、雙酶切及測(cè)序進(jìn)行鑒定后，采用脂質(zhì)體和納米兩種方法分別轉(zhuǎn)入Hel

2、a和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，用熒光顯微鏡和Western blot鑒定轉(zhuǎn)染情況。
　　結(jié)果:重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF經(jīng)酶切和序列分析鑒定與預(yù)期設(shè)計(jì)一致;利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒成功導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中有效表達(dá);嘗試?yán)眉{米轉(zhuǎn)染方式將質(zhì)粒導(dǎo)入Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中，并且轉(zhuǎn)染成功，并在Hela及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中有效表達(dá)。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒EGFP-N1-BDNF