脂質體介導質粒pEGFP-N1轉染對小鼠睪丸生精功能的影響.pdf

1、目的：應用脂質體介導的基因轉染法，結合顯微注射向昆明（KM）小鼠睪丸曲細精管內導入外源質粒pEGFP-N1，評價脂質體DATAP對睪丸生精功能的影響以及其介導質粒體內轉染的效率。為下一步向睪丸內導入與精子形成有關的基因，闡明這種導入基因對生精功能的影響，從而探討少精、弱精的男性不育患者在基因治療方面的可行性。
　　 方法：將8-10周雄性KM小鼠75只隨機分成3組，第一組（A 組，n=25），運用顯微注射法，向雙側睪丸曲細精管內

2、注射脂質體DOTAP/質粒pEGFP-N1；第二組（B 組，n=25），向睪丸曲細精管內注射質粒pEGFP-N1；第三組（C 組，n=25），向睪丸曲細精管內注射PBS緩沖液。分別于術后1、2、4、6、8周頸椎脫臼處死小鼠，取出睪丸和附睪，睪丸行冰凍切片，常規(guī)HE 染色，JS 計數(shù)（JS）評分法評估睪丸生精功能；脫氧核糖核酸末端轉移酶介導的dUTP 的缺口末端標記技術(TUNEL)檢測睪丸生殖細胞凋亡，并計算凋亡指數(shù)（AI）；熒光顯微鏡

3、觀察質粒pEGFP-N1 導入后的轉染效率；附睪精子行精液分析。
　　 結果：三組KM小鼠曲細精管顯微注射后JS 評分提示睪丸生精功能下降，4周后達到最低，隨后生精功能開始恢復，8周后達到正常，三組之間JS計數(shù)比較無統(tǒng)計學意義。TUNEL 檢測細胞凋亡，三組中均4周后凋亡細胞最多，8周后恢復正常，三組之間AI 指數(shù)比較亦無統(tǒng)計學意義。熒光顯微鏡下觀察各組睪丸冰凍切片均未見綠色熒光。
　　 結論：脂質體DOTAP本身對小鼠