淫羊藿總黃酮對小鼠隱睪與隱睪復(fù)位后睪丸生精功能的影響.pdf

1、　　目的：通過手術(shù)建立小鼠隱睪模型,研究淫羊藿總黃酮對隱睪小鼠的生精功能保護(hù)作用,并初步探尋其可能的作用機(jī)制；通過對隱睪模型小鼠行隱睪復(fù)位固定手術(shù),研究淫羊藿總黃酮對隱睪小鼠行復(fù)位固定術(shù)后睪丸的生精功能恢復(fù)的促進(jìn)作用,進(jìn)一步探索其對促進(jìn)生精功能恢復(fù)作用的可能機(jī)制。
　　方法：(1)實驗一：將小鼠睪丸提到腹腔并封閉內(nèi)環(huán)口建立小鼠隱睪模型,將已建立隱睪模型的小鼠隨機(jī)分為模型組、淫羊藿總黃酮低、高劑量組,另取假手術(shù)的小鼠作為假手術(shù)組,

2、于造模手術(shù)第2天開始,淫羊藿總黃酮低、高劑量組分別灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1的淫羊藿總黃酮,假手術(shù)組和模型組給予1%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.01 mL·g-1灌胃,每天1次,連續(xù)給藥14 d后進(jìn)行實驗。末次給藥24 h后,稱小鼠體重并記錄,處死小鼠,取睪丸并稱濕重,切取一側(cè)睪丸組織經(jīng)橫軸剪切、固定、包埋,經(jīng)HE染色和電鏡染色后分別進(jìn)行睪丸組織顯微、超微病理形態(tài)學(xué)分析,并對HE染色的病理切片作Johnse

3、n評分分析,免疫組織化學(xué)方法檢測睪丸組織中核增殖抗元(PCNA)的表達(dá)情況并作定量分析,剩余部分的睪丸組織通過PCR技術(shù)檢測SOD2 mRNA、SITR3 mRNA的表達(dá)；另一側(cè)睪丸組織勻漿,進(jìn)行谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量檢測；剪碎附睪于1 mL精子營養(yǎng)液中,檢測精子密度和活率。(2)實驗二：按實驗一方法建立隱睪模型后,將已建立隱睪模型的小鼠隨機(jī)分為模型組、淫羊藿總黃酮低、高

4、劑量組,另取假手術(shù)的小鼠作為假手術(shù)組,常規(guī)飼養(yǎng)14 d后,對模型組及淫羊藿總黃酮低、高劑量組小鼠隱睪行隱睪復(fù)位固定手術(shù),術(shù)后假手術(shù)組和模型組每天灌服1%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)0.01 mL·g-1,淫羊藿總黃酮低、高劑量組分別灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1淫羊藿總黃酮,每天1次,各組小鼠連續(xù)給藥14 d。于末次給藥24 h后,稱小鼠體重并記錄,處死小鼠,取睪丸和附睪并稱濕重,切取一側(cè)睪丸組織經(jīng)橫軸剪切、固定、

5、包埋制成蠟塊,經(jīng)HE染色和電鏡染色后分別進(jìn)行睪丸組織顯微和超微病理形態(tài)學(xué)分析,另一側(cè)的睪丸組織通過PCR技術(shù)進(jìn)行SCF mRNA、GDNF mRNA的表達(dá)分析,另一側(cè)睪丸組織進(jìn)行生精細(xì)胞分離,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測睪丸生殖細(xì)胞周期。
　　結(jié)果：(1)淫羊藿總黃酮能夠增加隱睪小鼠的睪丸重量,提高精子密度與精子活率；改善小鼠睪丸組織的病理學(xué)變化,增加小鼠睪丸組織的Johnsen評分；顯著降低睪丸組織中MDA含量,提高SOD和GPX活性,

6、上調(diào)SOD2 mRNA、SIRT3 mRNA的表達(dá),調(diào)節(jié)氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡。(2)在隱睪模型小鼠復(fù)位固定手術(shù)后,淫羊藿總黃酮能夠有效恢復(fù)睪丸生精小管上皮結(jié)構(gòu),促進(jìn)精原干細(xì)胞與初級精母細(xì)胞進(jìn)一步分裂成次級精母細(xì)胞,并促進(jìn)次級精母細(xì)胞向精子細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,恢復(fù)各級生精細(xì)胞百分比,顯著增加小鼠睪丸中GDNF mRNA、SCF mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論：(1)淫羊藿總黃酮能減輕隱睪所致的小鼠生精功能損傷,其作用機(jī)制可能與上調(diào)SIRT3