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文檔簡介
1、目的:體外構建重組質粒pEGFP-N1-apoJ,轉染大鼠骨髓間充質干細胞,并檢測其在大鼠骨髓間充質干細胞中的表達,探索最優(yōu)轉染條件。
方法:體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞,利用脂質體轉染pEGFP-N1-apoJ,探索最優(yōu)轉染條件,確定轉染效率,并通過Real-time PCR、免疫細胞化學法、Western Blot法檢測載脂蛋白J(apoJ)的表達。
結果:轉染后大鼠骨髓間充質干細胞中綠色熒光蛋白得到表達,脂質體
2、5 ul與重組質粒2.0 ug形成轉染復合物進行轉染后72小時轉染效率為35%。利用Real-time PCR、免疫細胞化學法和western blot法檢測證實了重組質粒pEGFP-N1-apoJ攜帶的外源性aopJ在大鼠骨髓間充質干細胞中的表達。
結論:利用脂質體介導重組質粒pEGFP-N1-apoJ成功轉染體外培養(yǎng)的BMSCs,脂質體LipofectamineTM20005 ul與重組質粒pEGFP-N1-apoJ2.0
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