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1、目的:星形膠質(zhì)細(xì)胞(Astrocytes)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)最為豐富的一類膠質(zhì)細(xì)胞其功能與許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)重大疾病相關(guān),如缺血性腦卒中,阿爾茨海默病、癲癇、神經(jīng)系統(tǒng)變性病等。其中許多疾病的發(fā)生發(fā)展均涉及谷氨酸誘導(dǎo)的興奮毒性過程,而星形膠質(zhì)細(xì)胞對谷氨酸濃度調(diào)控有直接作用。目前研究發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞不但有攝取谷氨酸減輕細(xì)胞毒性的作用,還存在釋放谷氨酸的多種機制,并且這種釋放機制在病理條件下容易引發(fā)從而加重細(xì)胞毒性。那么星形膠質(zhì)細(xì)胞在病理條件下發(fā)
2、揮怎樣的功能仍需要進一步討論。 淀粉樣蛋白前體蛋白(Amyloid precursor protein,APP)系一種跨膜蛋白,可被α-分泌酶(ADAM10、TACE及ADAM9等)、β-分泌酶(BACE1)及γ-分泌酶(早老素-1、早老素-2、Nicastrin、Aph-1及Pen-2復(fù)合體)水解,釋放出分泌性APP(sAPPα及sAPPβ)以及β淀粉樣蛋白(Aβ)等多種活性代謝產(chǎn)物。APP在γ-分泌酶和β-分泌酶共同作用下可
3、以產(chǎn)生與阿爾茨海默病直接相關(guān)的Aβ40或Aβ42。γ-分泌酶的切割位點決定Aβ40/Aβ42生成比,而早老素-1(PS 1)是γ-分泌酶發(fā)揮功能的核心部位,由此可見APP/PS1與Aβ的產(chǎn)生數(shù)量直接相關(guān)。所以,我們試提出本課題研究:應(yīng)用50μM濃度的谷氨酸在海馬神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系及神經(jīng)元單獨培養(yǎng)體系中對比觀察APP、PS1表達變化及細(xì)胞損傷程度,從而了解星形膠質(zhì)細(xì)胞抗興奮毒性作用及其對APP、PS1表達的影響并探討其相關(guān)機
4、制,期望通過調(diào)控星形膠質(zhì)細(xì)胞為神經(jīng)系統(tǒng)重大疾病的治療提供新的策略和手段。 方法:我們建立原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元單獨培養(yǎng)體系及神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系,在第10-12天用終濃度為50μM濃度的谷氨酸以及5μM濃度的甘氨酸來建立興奮毒性損傷模型。通過臺盼蘭染色判斷細(xì)胞損傷程度,利用免疫熒光雙重標(biāo)記的方法觀察海馬神經(jīng)元興奮毒性神經(jīng)損害過程中存活細(xì)胞中APP、PS1的表達水平及分布變化。 結(jié)論: 在50μM濃度的谷氨
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