茶樹(shù)種子在低溫貯藏過(guò)程中差異基因表達(dá)的研究.pdf

1、中國(guó)是茶樹(shù)的起源地,種質(zhì)資源極其豐富,但由于自然和人為的眾多因素,茶樹(shù)種質(zhì)資源的流失由來(lái)已久。所以為長(zhǎng)期保存茶樹(shù)的遺傳信息,保護(hù)茶樹(shù)種質(zhì)資源,尋找可長(zhǎng)期保存茶樹(shù)種質(zhì)資源的途徑就非常重要。成熟茶樹(shù)種子含水率在35～40％左右,一般認(rèn)為屬頑拗型種子,在保存上存在較大的困難。傳統(tǒng)的貯藏方法是沙藏,即保存在一定濕度、溫度和通氣條件的環(huán)境中,但隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng),發(fā)芽率迅速下降,半年后只有20％左右。 目前種質(zhì)保存的最主要方式是在低溫種質(zhì)

2、庫(kù)中保存,但種質(zhì)在低溫庫(kù)中的保存也存在種子老化等問(wèn)題。且茶樹(shù)種子不耐低溫,低溫貯藏時(shí)種子的活性一般只能維持幾個(gè)月的時(shí)間,從保存種質(zhì)資源角度來(lái)看,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能達(dá)到要求。到目前為止,對(duì)頑拗型種子的研究主要集中在貯藏條件與種子發(fā)芽力的關(guān)系以及低溫貯藏過(guò)程中生理、生化和細(xì)胞學(xué)研究上,在分子水平上對(duì)頑拗型種子不耐低溫的本質(zhì)研究得較少。為此本實(shí)驗(yàn)采用cDNA-AFLP技術(shù),以茶樹(shù)無(wú)性系龍井43種子為實(shí)驗(yàn)材料,進(jìn)行如下研究： (1)茶樹(shù)種子臨界含

3、水量的測(cè)定(2)茶樹(shù)種子低溫貯藏過(guò)程中差異表達(dá)基因研究①利用cDNA-AFLP方法,研究同一品種茶樹(shù)種子低溫誘導(dǎo)后基因表達(dá)差異。 ②對(duì)差異條帶克隆測(cè)序后,以RT-PCR技術(shù)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行鑒定。 ③用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆對(duì)其全長(zhǎng)cDNA序列和序列分析。 結(jié)果獲得8條差異片段,通過(guò)NCBI進(jìn)行BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)有6條基因與已知功能基因相關(guān)。這些差異表達(dá)的片段序列可分為6類分別是：金屬蛋白