茶樹冷馴化過程中基因表達(dá)差異的初步分析.pdf

1、茶樹原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶地區(qū)，是一種喜溫暖，濕潤氣候條件的植物，其對(duì)低溫敏感。怎樣提高茶樹的抗寒性，已日益引起人們的高度重視。日益增加的研究表明，在植物冷馴化過程中所發(fā)生的一系列變化是通過低溫改變基因表達(dá)而引起的，并已克隆了許多相關(guān)的基因。而在茶樹上，關(guān)于冷馴化過程中基因表達(dá)情況的變化尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)研究。研究茶樹冷馴化過程中的基因表達(dá)變化，揭示茶樹抗寒機(jī)理，對(duì)于茶樹種質(zhì)資源的利用、引種、育種和栽培技術(shù)的提高都具有重要意義。 本研究以

2、相對(duì)電導(dǎo)率為抗寒性指標(biāo)研究了茶樹在冷馴化過程中抗寒性的變化，發(fā)現(xiàn)茶樹對(duì)于溫度變化比較敏感，冷馴化過程化中抗寒性變化的大體趨勢是隨著溫度的降低而升高，溫度的升高而降低，并且茶樹在冷馴化過程中對(duì)不同的低溫條件作出不同的反應(yīng)。當(dāng)外界溫度低于生物學(xué)溫度高于一定低溫(4℃)時(shí)其具有并維持一定的抗寒性，當(dāng)外界溫度降低至4℃以下時(shí)，茶樹抗寒性能夠繼續(xù)增強(qiáng)抵御更強(qiáng)的低溫傷害。 采用mRNA差別顯示的方法對(duì)3個(gè)具有代表性拐點(diǎn)的樣品進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)

3、現(xiàn)抗寒性不同的樣品存在基因差異表達(dá)。根據(jù)差異片段設(shè)計(jì)引物，用RT-PCR的方法進(jìn)行陽性鑒定，共得到15個(gè)陽性片段，其中9個(gè)表達(dá)量增加，5個(gè)表達(dá)量降低，1個(gè)樣品2的表達(dá)量增加。經(jīng)過BLAST比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)這些基因與如下基因同源：nectarin Ⅲ蛋白基因(3)、甘油磷酸二酯磷酸二酯酶蛋白家族基因(48)、微管蛋白特異性C伴侶基因(52)、光合系統(tǒng)Ⅱ蛋白D1基因(80、138)、卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶基因(147)、順式玉米素葡糖基轉(zhuǎn)移酶

4、基因(H4)、核糖體蛋白S14基因(H33)、1，5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亞基基因(H44)。15、82和134經(jīng)比對(duì)與葡萄的蛋白同源性較高，但是均為假定的蛋白，沒有具體的功能。72、H27和H44經(jīng)比對(duì)沒有同源性基因，可能是新基因。 根據(jù)茶樹EST文庫選取了6個(gè)與植物抗逆相關(guān)的EST序列，并設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RT-PCR分析這幾個(gè)基因在茶樹冷馴化過程中的變化。研究發(fā)現(xiàn)除脂肪酸去飽和酶6與抗寒性提高關(guān)系不大外，其它幾個(gè)EST即