鈣激活性中電導鉀離子通道在人宮頸癌HeLa細胞中的作用與機制研究.pdf

1、目的：了解鈣激活性中電導鉀離子通道(IKCal)在宮頸癌HeLa細胞中的表達以及其對細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響。 方法：在培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細胞中加入含有不同濃度IKCal阻斷劑(克霉唑，CLT)(5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L，)的RPMI-1640完全培養(yǎng)液，分別培養(yǎng)24h、48h、72h，用MTT法檢測HeLa細胞增殖的情況，應(yīng)用細胞計數(shù)的方法測定細胞生長曲線；并在倒置相差顯微鏡

2、、透射電鏡下觀察20μmol/L克霉唑的RPMI-1640完全培養(yǎng)液培養(yǎng)48h后HeLa細胞的凋亡情況；流式細胞技術(shù)檢測不同濃度克霉唑培養(yǎng)48h后細胞周期和細胞凋亡率的變化；半定量RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)檢測不同濃度克霉唑作用24h、48h、72h后，HeLa細胞中IKCal mRNA表達水平的變化。 結(jié)果：(1)克霉唑以濃度和時間依賴的方式抑制HeLa細胞增殖，40μmol/L克霉唑作用72h時抑制作用最顯著，

3、細胞生長抑制率高達89.83％；(2)20μmol/L克霉唑作用48h時，倒置相差顯微鏡下可見細胞體積縮小，多數(shù)細胞形態(tài)由多角形變成卵圓形或圓形；電鏡下可見細胞內(nèi)胞核固縮，核染色質(zhì)增多、積聚成團塊狀分布于核膜內(nèi)側(cè)、線粒體嵴消失、形成空泡等凋亡的形態(tài)學變化。(3)流式細胞術(shù)檢測顯示，隨克霉唑濃度由O增加到40μmol/L，HeLa細胞凋亡率逐漸增加，克霉唑作用48h時細胞凋亡率由(1.55±0.04)％增加到(64.78±5.34)％；H

4、eLa細胞周期分布與對照組相比，G0/G1期細胞由(55.85±3.02)％增加到(96.46±6.52)％，S期細胞比例由(34.82±5.55)％下降到(3.49±0.20)％，G2/M期細胞比例由(9.33±0.78)％下降到(0.05±0.01)％。(4)RT-PCR結(jié)果顯示克霉唑下調(diào)HeLa細胞IKCa1 mRNA表達水平，IKCa1m RNA的相對表達量隨克霉唑濃度的升高而呈下降趨勢。 結(jié)論：IKCa1具有調(diào)控HeL