脂多糖下調(diào)泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá)與核因子-κB途徑相關(guān).pdf

1、目的:脂多糖(LPS)與Toll樣受體4(TLR4)結(jié)合后啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,包括激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κB途徑從而與人動(dòng)脈粥樣硬化病變中炎癥的激活相關(guān)。本文觀察LPS對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)表達(dá)和膽固醇流出的影響,并探討LPS對(duì)ABCA1的作用是否與TLR4-NF-κB途徑相關(guān)以及LPS是否通過LXRs調(diào)控ABCA1的表達(dá)。
　　方法:THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞經(jīng)不同濃度(0,

2、0.2,2,20,200 ng/ml)的LPS處理或者用20 ng/ml LPS作用不同時(shí)間(0,6,12,24h);以20 ng/ml LPS單獨(dú)或20μM的NF-κB抑制劑對(duì)甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(N-p-Tosyl-L-phenylalanine chloro-methyl ketone, TPCK)預(yù)處理細(xì)胞2h再加入LPS處理24小時(shí),運(yùn)用油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴含量的變化,液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,高效液

3、相色譜分析細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè) ABCA1、TLR4和LXRα mRNA表達(dá)情況, Western印跡法檢測(cè)ABCA1、LXRα及核內(nèi)NF-κB p65蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:LPS可以使THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)脂滴增多,膽固醇流出減少,細(xì)胞總膽固醇、游離膽固

4、醇與膽固醇酯增加,呈濃度和時(shí)間依賴性抑制ABCA1 mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá),而TLR4 mRNA和核內(nèi)NF-κB p65蛋白質(zhì)的表達(dá)水平增加。用NF-κB途徑抑制劑TPCK預(yù)處理后,LPS的這種作用可以被部分抑制。LXRαmRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)均不受LPS和TPCK的影響。
　　結(jié)論:LPS抑制THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積,TLR4-NF-κB信號(hào)途徑介導(dǎo)LPS對(duì)ABCA1的