兒茶素單體對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸粘膜的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景: 炎癥性腸病(InflammatoryBowelDisease，IBD)是病因尚未確定的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UlcerativeColitis，UC)和克羅恩病(Crohn'sDisease，CD)。IBD在我國(guó)發(fā)病率比較低，但近年來(lái)有大幅增加的趨勢(shì)。由于該疾病自然病程的復(fù)雜特殊及對(duì)患者生活質(zhì)量的嚴(yán)重影響，IBD的治療現(xiàn)已成為消化系統(tǒng)疾病中的難點(diǎn)，日益受到關(guān)注。由于目前國(guó)內(nèi)外尚未找到特異性治療

2、藥物，尋找其他療效顯著且副作用小的藥物以替代目前的常規(guī)藥物已成為全世界研究的熱點(diǎn)。其中純天然提取無(wú)毒無(wú)害的植物藥在此方面有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是綠茶中茶多酚的主要成分，為全天然提取，無(wú)毒無(wú)害，具抗氧化、抗炎及抗腫瘤等多種生物學(xué)活性。2006年10月31日，EGCG被美國(guó)FDA批準(zhǔn)為第一個(gè)植物處方新藥，主要用于人類(lèi)乳頭瘤病毒(HPV)引起的生殖器疣，更是把它

3、在臨床上的應(yīng)用提升到一個(gè)新的境界，引發(fā)人們對(duì)它在其它疾病的應(yīng)用進(jìn)行了多方面的探索。 目的和意義: 我們?cè)诮⑷趸交撬?2，4，6—trinitrobenzenesulfollicacid，TNBS)這種經(jīng)典大鼠IBD模型的基礎(chǔ)上，國(guó)內(nèi)首次采用灌腸給藥方式來(lái)觀(guān)察EGCG對(duì)這種大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的作用效果，進(jìn)而從不同角度對(duì)其有關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討，以期為EGCG成為IBD有效治療藥物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法:

4、 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組：將50只SD大鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、EGCG組及EGCG預(yù)處理組，每組10只。大鼠禁食不禁水24h后，將溶于500ml/L乙醇的TNBS按100mg/kg，體積0.25ml/只，用導(dǎo)管(直徑4mm)經(jīng)肛門(mén)插入結(jié)腸內(nèi)約8cm灌腸，建立IBD模型。陽(yáng)性藥物對(duì)照組、EGCG組制模24h后，分別用5—ASA(100mg/kg)、EGCG(100mg/kg)灌腸2周，1次/d；EGCG預(yù)處理組在

5、制模前3d給予100mg/kgEGCG灌腸干預(yù)，1次/d，大鼠TNBS誘導(dǎo)制模后，給予100mg/kgEGCG灌腸2周，1次/d。正常對(duì)照組與模型組均給予等量生理鹽水灌腸治療。 2.肉眼觀(guān)察大鼠結(jié)腸大體結(jié)構(gòu)的改變，并評(píng)價(jià)結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)(CMDI)。取腸組織制作石蠟切片行HE染色及評(píng)分。 3.按試劑盒方法檢測(cè)腸組織中MPO、MDA和NO的含量；Hoechst33258熒光染色法檢測(cè)大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡的情況。

6、4.分別用免疫組化、RT—PCR檢測(cè)腸粘膜iNOS的蛋白和mRNA表達(dá)。 5.ELISA檢測(cè)腸組織中PGE2含量，分別用免疫組化、RT—PCR檢測(cè)腸粘膜COX-2的蛋白和mRNA表達(dá)。 6.分別用ELISA、RT—PCR檢測(cè)大鼠血清、腸組織IL-1、IL-10的水平。 7.WesternBlotting檢測(cè)大鼠腸粘膜NF—κBp65蛋白水平的變化。 8.計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩樣本均數(shù)的比較采用St

7、udent'st—test，多樣本均數(shù)的比較采用OneWayANOVA。P<0.05為有顯著性差異。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)論: 1.EGCG灌腸能不同程度改善實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸粘膜大體結(jié)構(gòu)及病理組織學(xué)征象，其中以EGCG預(yù)防灌腸的效果最好。 2.EGCG起保護(hù)作用的機(jī)制包括：1)抗氧化、抗凋亡作用；2)抑制iNOS的活性，從而減少毒性物質(zhì)NO的生成；3)降低COX-2的表達(dá)，減少組織中花生四烯

8、酸代謝產(chǎn)物PGE2產(chǎn)生。4)局部下調(diào)腸組織中IL-1表達(dá)，而上調(diào)腸組織中IL-10的表達(dá)。 3.EGCG可通過(guò)降低NF—κBp65蛋白的表達(dá)，下調(diào)COX-2、iNOS的表達(dá)，使其產(chǎn)物PGs、NO生成減少，從而達(dá)到減輕炎癥的目的。因此NF—κB可作為EGCG治療大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的一個(gè)有效的分子“靶點(diǎn)”。 4.我們的實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)，EGCG是一種有效的預(yù)防和治療IBD的植物藥，它在經(jīng)濟(jì)性和安全性上的優(yōu)勢(shì)，使之更具有廣闊的開(kāi)發(fā)和