同型半胱氨酸對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸纖維化的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景:克羅恩病(Crohn’s disease,CD)是一種病因未明的慢性非特異性腸道肉芽腫性疾病,腸纖維性狹窄是CD常見(jiàn)并發(fā)癥之一,目前尚無(wú)有效的治療藥物,手術(shù)是最終治療手段,術(shù)后仍有約70％患者再次發(fā)生狹窄,反復(fù)發(fā)生的腸狹窄嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸,是甲硫氨酸去甲基化過(guò)程的中間產(chǎn)物,研究顯示 Hcy與心、肝、腎、肺等多種組織器官纖維化過(guò)程密切相關(guān),多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)在 CD患

2、者血漿和腸黏膜中 Hcy水平明顯增高,但對(duì)于Hcy是否參與CD腸纖維化的病理過(guò)程目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。因此,探討Hcy對(duì)CD腸纖維化的影響及其可能機(jī)制對(duì)于CD腸纖維化狹窄的防治具有重要的理論和實(shí)際意義。
　　目的:探討同型半胱氨酸(Hcy)對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸纖維化的影響及其可能機(jī)制。
　　方法:1.采用2,4,6-三硝酸苯磺酸(TNBS)灌腸制備大鼠 CD模型。對(duì)照組以等體積的生理鹽水(NS)灌腸;2.SD大鼠隨機(jī)分為四組(

3、n=8):正常對(duì)照組(NS灌腸+皮下注射N(xiāo)S)、正常對(duì)照+Hcy注射組(NS灌腸+皮下注射Hcy)、TNBS模型對(duì)照組(TNBS/乙醇灌腸+皮下注射N(xiāo)S)、TNBS模型+Hcy注射組(TNBS/乙醇灌腸+皮下注射 Hcy);3.記錄大鼠體重變化并進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分(DAI),實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取部分結(jié)腸行大體損傷評(píng)分(CMDI),HE染色和Masson染色行結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分(HI)及纖維化評(píng)分;4.高效液相熒光檢測(cè)法(HPLC-FD)檢測(cè)大

4、鼠血漿及結(jié)腸組織Hcy水平,結(jié)腸勻漿檢測(cè)MDA含量及SOD、GSH-PX、MPO活性,酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定結(jié)腸勻漿IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、CTGF、MMP-2、MMP-9、Ⅰ型和Ⅲ型膠原水平,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè) TGF-β1、MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平,免疫組化SP法檢測(cè)結(jié)腸組織MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,TNBS

5、結(jié)腸炎大鼠體重明顯減輕,出現(xiàn)不同程度的肉眼血便,DAI評(píng)分增高(p<0.05);CMDI、HI及纖維化評(píng)分均顯著增高。結(jié)腸組織MPO活性增高,SOD、GSH-PX活性降低,MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、CTGF、MMP-2、MMP-9、Ⅰ型和Ⅲ型膠原水平增高,MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)增強(qiáng),TGF-β1、MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)增強(qiáng)(p<0.05)。與TNBS模型對(duì)照組比較,皮下注

6、射Hcy的結(jié)腸炎大鼠血漿及結(jié)腸組織Hcy水平明顯增高,DAI、CMDI、HI及纖維化評(píng)分增高,結(jié)腸組織SOD、GSH-PX活性降低,MPO活性、MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1、CTGF、MMP-2、MMP-9、Ⅰ型和Ⅲ型膠原水平均明顯增高(p<0.05)。
　　結(jié)論:Hcy可加重實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎大鼠腸纖維化,機(jī)制可能與增加結(jié)腸氧化及炎癥損傷、促進(jìn)TGF-β1、CTGF等促纖維化因子表達(dá)以及通過(guò)影響MMPs/TI