探討殼寡糖對(duì)壞死性小腸結(jié)腸炎新生大鼠腸黏膜的保護(hù)作用.pdf

1、目的：采取缺氧復(fù)氧、冷刺激和人工喂養(yǎng)多因素建立新生SD大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎（necrotizing enterocolitis，NEC）模型；探討用殼寡糖(chitosan oligosaccharide， COS)干預(yù)對(duì)NEC新生大鼠腸道的保護(hù)作用，為使用殼寡糖防治壞死性小腸結(jié)腸炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：選取孕期為同一日的5只清潔級(jí)健康雌性SD大鼠(由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，待其自然分娩后，選取同日出生體重大于5克的新生鼠

2、36只，平均體重約5.5±0.4克，雌雄不限，隨機(jī)分為模型組（A組）、殼寡糖干預(yù)組（B組）及正常對(duì)照組（C組），每組12只。新生鼠前兩日與母鼠同籠，自第三日開始，A組與B組脫離母鼠，給予人工喂養(yǎng)。A組中新生鼠給予配方乳人工喂養(yǎng)，每日2次連續(xù)3日給予100％氮?dú)馊毖?0秒、100％氧氣復(fù)氧3分鐘、4℃冷刺激10分鐘；B組給予殼寡糖強(qiáng)化配方乳人工喂養(yǎng)，每日2次連續(xù)3日給予100％氮?dú)馊毖?0秒、100％氧氣復(fù)氧3分鐘、4℃冷刺激10分鐘；C

3、組為全程母乳喂養(yǎng)，不作任何處理。每日定時(shí)稱量新生大鼠體重。第六日A、B和C三組均予以禁食一日。第七日采用頸椎脫臼法處死全部新生大鼠，取1.5～2cm回腸末段組織固定、切片，進(jìn)行病理、TUNEL檢測(cè)和電鏡檢查。將剩余的回腸組織制成組織勻漿，采用 ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)腸組織勻漿中血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)和分泌型免疫球蛋白 A(secretary immunoglobulin A，S

4、IgA)的含量。
　　結(jié)果：
　　1.各組一般生長(zhǎng)發(fā)育情況
　　模型組和殼寡糖干預(yù)組新生大鼠在進(jìn)行造模第二日，開始出現(xiàn)不同程度地活動(dòng)度下降、腹脹、腹瀉、消瘦，模型組中小鼠還出現(xiàn)抽搐，甚至死亡；正常對(duì)照組新生大鼠活動(dòng)正常，反應(yīng)靈敏，體重增加明顯，食納及排便均正常。在實(shí)驗(yàn)期間，于造模后第四日模型組中出現(xiàn)2例死亡，而殼寡糖干預(yù)組與正常對(duì)照組中無死亡。各組新生鼠體重均有所增長(zhǎng)，增長(zhǎng)幅度為：模型組0.96±0.23g，殼寡糖干預(yù)

5、組1.99±0.56g，正常對(duì)照組4.27±0.28g，殼寡糖干預(yù)組體重增長(zhǎng)明顯大于模型組，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.各組新生大鼠腸組織病理形態(tài)學(xué)
　　模型組、殼寡糖干預(yù)組和正常對(duì)照組腸組織病理改變?cè)u(píng)分分別為2.92±0.93、2.00±0.64、0.38±0.31，殼寡糖干預(yù)組與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。模型組中腸損傷組織病理學(xué)評(píng)分范圍為2～4分，具體表現(xiàn)是從黏膜下和(或)固有層

6、中度分離、或從黏膜下和肌肉層中度水腫到全部絨毛消失腸壁壞死，符合典型NEC病理改變；殼寡糖干預(yù)組評(píng)分范圍為1～3分，從輕微黏膜下和(或)固有層分離到黏膜下和(或)固有層重度分離、或從黏膜下和肌肉層重度水腫到局部絨毛消失脫落；正常對(duì)照組評(píng)分范圍為0～1分，腸黏膜上皮組織結(jié)構(gòu)完整。
　　3.各組新生大鼠腸組織PAF、SIgA含量
　　模型組、殼寡糖干預(yù)組和正常對(duì)照組腸組織PAF含量分別為33.91±1.87μg/ml、25.21

7、±1.76μg/ml、17.55±1.64μg/ml，殼寡糖干預(yù)組腸組織中PAF含量明顯低于模型組，兩組數(shù)據(jù)相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　模型組、殼寡糖干預(yù)組和正常對(duì)照組腸組織中SIgA含量分別為24.75±1.83μg/ml、31.81±1.31μg/ml、36.33±1.58μg/ml。殼寡糖干預(yù)組腸組織中SIgA含量明顯高于模型組，兩組數(shù)據(jù)相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.電鏡觀察：

8、模型組可見凋亡小體，提示處于凋亡晚期；殼寡糖干預(yù)組可見染色質(zhì)靠近核膜邊集，核孔擴(kuò)大，提示處于凋亡早期；正常對(duì)照組可以見到細(xì)胞核占細(xì)胞體積的大部分，結(jié)構(gòu)清晰，有核膜包被，提示正常細(xì)胞相。
　　5.TUNEL檢測(cè)腸上皮細(xì)胞凋亡率（%）：模型組為44.17±4.37，殼寡糖干預(yù)組為27.33±5.21，正常對(duì)照組為9.00±2.86，殼寡糖干預(yù)組腸上皮細(xì)胞凋亡率明顯低于模型組，兩組數(shù)據(jù)相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。