新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型的建立及PAF、TNF-a變化.pdf

1、目的： 1利用新生SD大鼠建立缺氧、冷刺激、人工喂養(yǎng)多因素造成的新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型并對其進(jìn)行評價。 2探討新生鼠腸損傷時腸組織PAF、TNF-a變化及其與腸道組織病理損傷程度的關(guān)系。 方法： 32只清潔級健康SD新生大鼠(由福建省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供)，體重約6．3+0．9克，按喂養(yǎng)方式、缺氧冷刺激兩因素兩個水平(2x2)，交叉分成(A、B、C、D)組，每組8只，雌雄不分。A組每天2次連續(xù)3天給予1

2、00％氮氣缺氧90秒，4'C冷刺激10分鐘加人工喂養(yǎng)；B組用鼠配方乳人工喂養(yǎng)3天，未受缺氧和冷刺激；C組每天2次連續(xù)3天給予100％氮氣缺氧90秒，4'C冷刺激10分鐘、母乳喂養(yǎng)；D組為正常對照組。4天后頸椎脫臼法一起處死，取回腸末段組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。根據(jù)固有層分離、中性粒細(xì)胞浸潤，絨毛脫落、壞死，血管擴(kuò)張，間質(zhì)水腫，分為4級。0分--iF_常無損傷，1分一輕微黏膜下和或固有層分離，2分．中度黏膜下和或同有層分離和／或黏膜下和肌肉層水

3、腫，3分～嚴(yán)重黏膜下和或固有層分離和／或黏膜下和肌肉層水腫，局部絨毛脫落，4分一腸絨毛消失伴腸壞死。組織學(xué)評分≥2確定為NEC。將剩余腸組織制成組織均漿，采用ELISA雙抗體夾心法檢測腸組織中PAF、TNF-a濃度，以每毫克腸組織蛋白中PAF／TNF-a含量表示。 實驗結(jié)果以數(shù)據(jù)和圖表表示；數(shù)據(jù)計算以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。比較采用方差分析、Kruskal．WallisH檢驗。腸組織PAF、TNF-α含量與相應(yīng)組縱學(xué)評分做S

4、pearman等級相關(guān)分析。采取SPSSl3．0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。P<0．05為顯著性檢驗標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： l外觀表現(xiàn)： A組、B組、C組大鼠在造模第二天，開始不同程度地出現(xiàn)黃綠色黏液稀便、消瘦、體重減輕、逐漸出現(xiàn)胃潴留、腹脹、腹瀉、進(jìn)奶量下降、嗜睡常卷縮而臥、活動度下降、反應(yīng)遲鈍，行動緩慢，且逐漸加重，A組還可見膿血便；而正常對照組大鼠活動正常，反應(yīng)機(jī)警，體重增加較多，吃奶及大小便均正常。實驗期間，B組、C組與

5、D組無死亡，A組中2例在造模第3天死亡。 2各組病死率和病理組織學(xué)改變： A、B、C及D組腸損傷組織病理學(xué)改變評分(x±s)分別為3．25-4-0．89、2．63+0．92、1．134-1．36、0．25+0．46；A組腸損傷組織病理學(xué)改變評分范圍2～4分，表現(xiàn)為從中度黏膜下和或固有層分離和／或黏膜下和肌肉層水腫到絨毛消失腸壁全層壞死，NEC發(fā)病率為1.00％；B組腸損傷組織病理學(xué)改變評分范圍為1～4分，從輕微黏膜下和或

6、固有層分離到絨毛消失腸壞死，NEC發(fā)病率為87．5％；C組腸損傷組織病理學(xué)改變評分范圍為O～4分，NEC發(fā)病率為37．5％；D組NEC發(fā)病率為0．00％，腸損傷組織病理學(xué)改變評分范圍為O～1分。 Kruskal-WallisH檢驗顯示：不同組之間腸損傷組織病理學(xué)改變評分有顯著差異(H=19．298，x2o川(3)=11．34，P<0．01)；各組之間腸損傷組織病理評分均數(shù)進(jìn)行兩兩比較分析，結(jié)果人工喂養(yǎng)加缺氧冷刺激綜合作用(A組)

7、可明顯增加腸損傷評分，其評分值最大，但與人工喂養(yǎng)單因素造模組(B組)比較差異無顯著意義：B組腸損傷組織病理評分明顯高于C組，差異有顯著意義，說明人工喂養(yǎng)單因素和缺氧冷刺激在引起腸組織的NEC病變中所起的作用大小明顯不同：C組和D組之間腸損傷組織病理評分差異無顯著意義，證實了缺氧冷刺激單因素引起腸組織損傷的作用較小。 析因分析顯示：腸損傷組織病理評分受到喂養(yǎng)方式、有否缺氧冷刺激兩個因素影響，F(xiàn)值分別為44．039、4．893，p值

8、分別為0．000、0．035；喂養(yǎng)方式和缺氧冷刺激之間沒有明顯交互作用(F=O．136，P=0．715)。 3各組PAF、TNF-a含量比較及與組織病變程度的相關(guān)性： A、B、C及D組腸組織PAF含量[x±s，pg/mgpro]分別為2414．56~1428．10、1255．80~726．84、608．43~496．87、251．38~113．85。采用Kruskal-WallisH檢驗對各組之間腸組織中PAF含量進(jìn)行兩

9、兩比較分析，結(jié)果：A組腸組織PAF含量明顯高于C組，B組腸組織PAF含量明顯高于C組，B組腸組織PAF含量明顯高于D組，組問差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．01)，而A、B組間和C、D組之間PAF含量差別無統(tǒng)計學(xué)意義，說明人工喂養(yǎng)加缺氧冷刺激可顯著增加PAF分泌水平，其作用大于人工喂養(yǎng)或缺氧冷刺激單因素：Spearman等級相關(guān)分析表明，腸組織PAF含量與組織病變嚴(yán)重性呈正相關(guān)rs=0．71，P<0．05。 A、B、C及D腸組織中TN

10、F-a含量[x±s，pg／mgpro]分別為1057．52±407．37、678．33±394．66、347．99~247．06、225．30±224．24。采用Kruskal-WallisH檢驗對各組之間腸組織中TNF-a含量進(jìn)行兩兩比較分析，結(jié)果：A組腸組織TNF-a含量明顯高于C組，B組腸組織TNF-a含量明顯高于D組，組間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．01)；而A、B組間、B、C組間和C、D組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，說明人工喂養(yǎng)加缺氧

11、冷刺激可顯著增加TNF-a分泌水平，其作用大于人工喂養(yǎng)或缺氧冷刺激單因素；Spearman等級相關(guān)分析表明，腸組織TNF-a含量與組織病變嚴(yán)重性呈正相關(guān)rs=0．81，P<0．05。 結(jié)論： l新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎是多因素綜合作用的結(jié)果，單一危險因素不能造成明顯的NEC病變；人工喂養(yǎng)加缺氧冷刺激對組織NEC損傷的作用大于人工喂養(yǎng)或缺氧冷刺激的單獨作用；利用人工喂養(yǎng)、缺氧、冷刺激誘導(dǎo)的新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型病理學(xué)

12、變化更符合新生兒NEC的病理特征，是一種理想的新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎實驗動物模型。 2炎癥因子PAF、TNF-a在新生鼠腸損傷組織中高表達(dá)，PAF、TNF-a與腸損傷組織病理改變的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，PAF、TNF-a可能通過激活其它炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子、增加血管通透性，產(chǎn)生炎癥級聯(lián)反應(yīng)，參與新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎病理過程。 3人工喂養(yǎng)在NEC的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用，不適當(dāng)?shù)娜斯の桂B(yǎng)能引發(fā)、加重腸組織損傷，促進(jìn)腸組織局部