2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、快節(jié)奏的生活,巨大的精神壓力,使得越來越多的人面臨脫發(fā)的困擾。脫發(fā)不僅僅影響外觀,對人的自信心也是一個十分大的打擊。因此,脫發(fā)原因及治療成為越來越多的人迫切需要解決的問題。
   脫發(fā)的發(fā)生與進(jìn)展一般與體內(nèi)雄激素的分泌有關(guān),人體毛囊是對雄激素敏感的靶器官,其生長具有周期性,通常經(jīng)歷生長期、退行期和休止期三個階段。人體分泌的雄激素主要為睪酮,睪酮在5α-還原酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)殡p氫睪酮,再與頭皮部毛囊靶細(xì)胞內(nèi)的雄激素受體結(jié)合,抑制毛乳

2、頭的生長發(fā)育,干擾毛囊細(xì)胞的生長代謝,使毛發(fā)提前進(jìn)入休止期,從而引起脫發(fā)。此外,部分人由于遺傳因素,毛囊對雄激素的敏感性較高,在正常雄性激素水平同樣可引起脫發(fā)。
   脫發(fā)的治療包括藥物治療和手術(shù)治療。目前得到臨床驗(yàn)證、醫(yī)療界認(rèn)可的治脫發(fā)有效藥物只有兩種:口服藥---非那雄胺片,外用藥---米諾地爾。非那雄胺片主要針對男性脫發(fā),也就是脂溢性脫發(fā),作用原理是抑制雄性激素分泌,最初該藥是治療前列腺的;米諾地爾原用于心血管疾病治療。目

3、前除了非那雄胺片和米諾地爾,多數(shù)防脫發(fā)產(chǎn)品沒有經(jīng)過有關(guān)實(shí)驗(yàn)、臨床證實(shí)。相比于毛發(fā)移植手術(shù),各種藥物治療脫發(fā)都具有明顯劣勢:一來是藥物只對輕微的脫發(fā)具有減緩作用,不能根治嚴(yán)重的脫發(fā);二是容易產(chǎn)生耐藥性、停藥后癥狀加重以及對身體產(chǎn)生其它副作用。
   毛發(fā)移植,將先天對雄激素不敏感部位的毛囊(一般為枕部)切割分離出來,移植到禿發(fā)的部位。枕部毛發(fā)具有先天性的供區(qū)優(yōu)勢,其不受雄性激素及其代謝產(chǎn)物影響,具有穩(wěn)定的生長期,不易脫落。從供區(qū)獲

4、取的毛囊移植到其它部位,成活后仍保留了枕部毛囊的特質(zhì),移植后的毛囊能夠長久的生長存活。盡管療效顯著,但移植手術(shù)其本質(zhì)是現(xiàn)有毛發(fā)在脫發(fā)區(qū)的再分布,那么患者自身需要擁有充足的供區(qū)毛發(fā)組織。對于一些嚴(yán)重的大面積脫發(fā)患者,這些修復(fù)技術(shù)往往無法實(shí)施。此外,患者術(shù)后脫發(fā)的進(jìn)行性發(fā)展,以及供區(qū)疤痕等因素,都進(jìn)一步限制了毛發(fā)移植技術(shù)的進(jìn)一步開展和運(yùn)用。
   Oliver等把大鼠觸須毛乳頭完全切除之后,毛乳頭缺失的觸須不再繼續(xù)生長而脫落,這說明

5、毛乳頭對于毛囊的功能維持是必須的。隨后Oliver把新分離的毛乳頭移植到被切去毛球部的毛囊下,3周后新的毛發(fā)長出,而被切去毛球但未移植毛乳頭的毛囊并不能長出新的毛發(fā)。這說明了毛乳頭對于毛囊的生長起著根本作用,并且毛乳頭細(xì)胞通過和毛囊上皮細(xì)胞的相互作用可以誘導(dǎo)形成新的毛發(fā)。后來科研人員們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)毛乳頭細(xì)胞除了結(jié)合毛囊上皮細(xì)胞可以誘導(dǎo)出毛發(fā),和其他類型的上皮細(xì)胞,如:角質(zhì)形成細(xì)胞、腎被膜等,同樣可以誘導(dǎo)毛發(fā)生長。
   胚胎時

6、期,真皮間充質(zhì)細(xì)胞相互聚集,誘導(dǎo)位于其上方的表皮干細(xì)胞增厚形成基板,基板向真皮內(nèi)延伸形成了毛囊芽,相互聚集的真皮細(xì)胞逐漸被毛囊芽所包裹進(jìn)而形成毛乳頭。表皮干細(xì)胞一部分轉(zhuǎn)化成為毛囊的上皮細(xì)胞,另一部分發(fā)育成為毛囊干細(xì)胞,仍能夠保持部分干細(xì)胞的特性。毛囊形成后,毛乳頭細(xì)胞和毛囊干細(xì)胞相互作用,形成了毛發(fā)周期性的生長和脫落。基于毛發(fā)的發(fā)生機(jī)制,科研人員們進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出,使用具有毛發(fā)誘導(dǎo)能力的細(xì)胞,模擬構(gòu)建胚胎時期上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞相互反

7、應(yīng)的內(nèi)環(huán)境發(fā)育模型,可以誘導(dǎo)毛發(fā)組織的形成。
   毛發(fā)重建技術(shù),使用重建毛發(fā)組織替代自體毛發(fā)移植物,有望在未來成為治療脫發(fā)的細(xì)胞學(xué)療法。毛發(fā)重建的動物模型主要有:小室法,皮瓣法,注射法等。小室法在1993年由Lichti報道并在2008年對此模型進(jìn)一步改進(jìn),在裸鼠背部體表做一切口并置入小室,將具有毛囊誘導(dǎo)能力的細(xì)胞移植入小室內(nèi),一周后將小室拆除,3周后創(chuàng)面逐漸愈合,新生毛發(fā)長出。此模型所重建毛發(fā)數(shù)量可觀、視覺效果好,但對組織創(chuàng)

8、傷較大、細(xì)胞需要數(shù)量多,因此僅限于動物實(shí)驗(yàn)以及毛發(fā)發(fā)生機(jī)制、毛囊細(xì)胞誘導(dǎo)能力的研究。為了實(shí)現(xiàn)更為簡潔、快速的毛發(fā)重建,Zheng等人建立了“Hair Patch Assay”,即通常所說的“注射法”。通過將誘導(dǎo)細(xì)胞混懸液直接注射入裸鼠皮下,進(jìn)而誘導(dǎo)形成毛發(fā)組織。簡單可行,且對動物創(chuàng)傷較小,是未來較有希望運(yùn)用于治療人類脫發(fā)的技術(shù)。但此方法的缺點(diǎn)在于,毛發(fā)在皮下誘導(dǎo)形成后不具備正常毛發(fā)組織的極性,且無發(fā)長出體表,為了實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)毛發(fā)組織有序合理

9、的分布于體表,此模型有待進(jìn)一步完善。
   本實(shí)驗(yàn)中,在原有動物模型的基礎(chǔ)上,我們對其進(jìn)一步改進(jìn),以期能夠在“微創(chuàng)”的條件下進(jìn)行毛發(fā)重建,最終得到符合正常生理結(jié)構(gòu)和外觀的毛發(fā)組織。
   目的:
   1.建立新生C57小鼠毛囊誘導(dǎo)細(xì)胞分離和鑒定方法
   2.使用內(nèi)置小室模型進(jìn)行毛發(fā)重建
   3.以注射法進(jìn)行毛發(fā)誘導(dǎo)并結(jié)合FUT(毛囊單位移植)技術(shù),實(shí)現(xiàn)毛發(fā)方向和密度的定向重建
  

10、方法:
   1.毛囊誘導(dǎo)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
   出生1天內(nèi)的C57鼠,在裝有75%的酒精中浸泡30s后取出置于培養(yǎng)皿中,剪去尾巴和四肢后剝離剩余皮膚,PBS(含1%青鏈霉素)清洗3次。將剝離的全層皮膚置于一新培養(yǎng)皿,加入0.1% dispase酶,37℃消化1.5小時,將表皮和真皮分離并分別剪碎,0.2%膠原酶37℃消化30min,每10分鐘吹打振蕩一次。隨后加入DMEM高糖培養(yǎng)基(含10%胎牛血清),200目篩

11、網(wǎng)過濾,去除組織碎片和細(xì)胞團(tuán)塊,收集濾液于離心管,1200 r/min離心5min,棄上清液,分別得到真皮和表皮細(xì)胞的沉淀。加入DMEM高糖培養(yǎng)基重懸,將真皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞以2∶1的比例混合,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/μL,150μL為一單位,備好細(xì)胞懸液待使用。
   按上述方法得制的真皮細(xì)胞沉淀,重懸后接種于培養(yǎng)皿中,24小時后觀察免疫組化檢測堿性磷酸酶,免疫熒光檢測Versican等與毛囊誘導(dǎo)能力相關(guān)標(biāo)記。
  

12、2.內(nèi)置小室法毛發(fā)重建的研究
   取1.5ml離心管,剪下蓋子并將中心挖空,打磨光滑,高溫高壓消毒備用。
   裸鼠使用10%戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔麻醉,成功麻醉后背部常規(guī)消毒,靠近尾側(cè)做一橫行切口長約1cm。皮下鈍性分離出一腔隙,將小室由切口處置入此腔中,縫合切口使內(nèi)置的小室固定。隨后將已備好的細(xì)胞懸液注射于皮下小室內(nèi),7天后剪開表皮取出內(nèi)置小室,創(chuàng)面曠置待其自然愈合。每日大體觀察皮膚愈合與毛發(fā)生長情況并取材組織學(xué)觀察毛

13、囊結(jié)構(gòu)
   3.注射法毛發(fā)重建后結(jié)合FUT進(jìn)行毛發(fā)的再分布
   裸鼠麻醉消毒,將制備好的毛囊誘導(dǎo)細(xì)胞懸液注射于裸鼠背部,2周后將皮下誘導(dǎo)形成的毛發(fā)組織取出,體式顯微鏡下分離得到“毛囊單位”,模擬FUT過程移植至裸鼠背部體表。術(shù)后觀察移植毛囊的生長與毛發(fā)的周期性特點(diǎn),隨后取材行組織學(xué)觀察。
   結(jié)果:
   1.將分離的真皮制備而成的細(xì)胞混懸液接種于培養(yǎng)皿中,24小時后觀察貼壁。48小時后細(xì)胞融合程度

14、達(dá)60%,甲醛固定清洗后行免疫組化、免疫熒光檢測,可見Versican、AKP呈陽性表達(dá)。
   2.誘導(dǎo)細(xì)胞移植入裸鼠背部內(nèi)置的小室中,7天后剪開表皮取出小室,可見小室下方形成帶有黑色素沉積的皮膚組織。隨后的5~10天中,創(chuàng)面逐漸愈合,大量毛發(fā)長出體表。組織學(xué)檢測可見正常毛囊結(jié)構(gòu)。
   3.誘導(dǎo)細(xì)胞直接注射到裸鼠皮下,2周后皮下形成異位毛發(fā)組織,輕微剝離并取出皮下毛發(fā)組織,在體視顯微鏡下分離為“毛70囊單位”隨后移植

15、于裸鼠背部,移植的毛發(fā)逐漸脫落而2周后新生毛發(fā)長出,密度與方向均符合預(yù)期,并具有毛發(fā)生長特有的周期性特點(diǎn)。組織學(xué)檢測可見正常毛囊結(jié)構(gòu)。
   結(jié)論:
   1.毛乳頭和真皮鞘內(nèi)的細(xì)胞,是特殊的間充質(zhì)細(xì)胞,具有某些特異性標(biāo)記。盡管許多蛋白marker的功能尚不清楚,但這些標(biāo)記已經(jīng)被廣泛用于毛乳頭和真皮鞘細(xì)胞的鑒定,以及毛發(fā)誘導(dǎo)能力的鑒定。多功能蛋白聚糖(Versican)、堿性磷酸酶(AKP)特異表達(dá)于毛乳頭細(xì)胞,有研究證

16、實(shí)表達(dá)這些標(biāo)記的細(xì)胞與誘導(dǎo)毛發(fā)形成的能力相關(guān)。分離消化得到的真皮間充質(zhì)細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)24小時后,免疫檢測Versican、AKP的表達(dá)呈陽性,說明此時細(xì)胞仍具有毛發(fā)誘導(dǎo)能力。
   2.內(nèi)置小室模型能夠成功進(jìn)行毛發(fā)重建,與傳統(tǒng)的小室法相比,其創(chuàng)面小、恢復(fù)快、感染率低,受外界環(huán)境因素的影響也較小,是更為優(yōu)化的毛發(fā)誘導(dǎo)模型。此外,毛發(fā)重建的同時在創(chuàng)面形成了新生的皮膚組織,我們推測這是由于誘導(dǎo)細(xì)胞首先形成了帶有毛囊等附屬器官的皮膚組織,進(jìn)

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