人工合成SARS抗原基因CAG的克隆、表達(dá)和抗原性分析.pdf

1、Y9055l0分類號R3921l單位代碼：10159學(xué)號：200321029中回鏨升失零碩士學(xué)位論文題目：人工合成sARs抗原基因cAG的克隆、表達(dá)和抗原性分析Molec“arcloning，expressionandantigenicitya—nalysisofani矗cialSARS—CAGgene研究生：塹煎～導(dǎo)師：趙雨杰論文課題起止時(shí)間：2004年1月一2006年3月論文完成時(shí)間：2006年5月(中文論著摘要)人工合成sARS抗

2、原基因cAG的克隆、表達(dá)及抗原性分析目的嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(severeacuterespiratorysyndrome，sARS)是一種新型急性傳染性疾病，它的高死亡率嚴(yán)重威脅著人類的健康，在2004年仍有病例散發(fā)。其病原體是一種新的冠狀病毒(sARscomnavirus，sARS—coV)，來源于野生動(dòng)物，sARS—CoV是單股正鏈RNA病毒，基因組全長約297kb，纖突蛋白(s)、囊膜蛋白(E)、基質(zhì)蛋白(M)、及核衣殼蛋白(N

3、)是它的主要結(jié)構(gòu)蛋白。其中s蛋白是sARs—coV主要的膜結(jié)合蛋白，為I型跨膜糖蛋白，在致病過程中s蛋白是主要的毒力因子，在病毒吸附細(xì)胞受體、細(xì)胞融合及誘導(dǎo)中和抗體產(chǎn)生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。為了預(yù)防sARS的再次流行，人們迫切需要一種安全有效的疫苗早日研制成功。目前有許多候選疫苗進(jìn)入臨床前研究，例如：滅活疫苗，DNA疫苗，多肽疫苗等。我們的實(shí)驗(yàn)是通過網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫結(jié)合生物信息學(xué)軟件分析的方法，確定s蛋白中可能在sARs—coV感染過程中起重要

4、作用并具有較好抗原性參數(shù)的結(jié)構(gòu)區(qū)域作為候選抗原表位，人工合成嵌合基因，體外表達(dá)后免疫家兔，為抗sARs基因工程疫苗的深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1抗原表位預(yù)測運(yùn)用生物信息學(xué)對sARS—coVs蛋白的二級結(jié)構(gòu)，親水性，穿膜螺旋，N一糖基化位點(diǎn)，氨基酸序列的親疏水性，表面可及性，分子剛性及抗原性參數(shù)進(jìn)行預(yù)測分析，設(shè)計(jì)抗原表位多肽。2基因合成和測序鑒定設(shè)計(jì)串聯(lián)多表位的嵌合基因，命名為cAG，全長1274bp由大連TaKa—Ra公司合成及測序驗(yàn)證