SARS-CoV結(jié)構(gòu)蛋白的抗原性鑒定、DNA免疫與RNA干擾的研究.pdf

1、2002年末始發(fā)于中國廣東省的非典型肺炎(infectious atypical pneumonia,),隨后也被稱為嚴(yán)重急性呼吸綜合征(The severe acute respiratory syndrome,SARS),具有高度傳染性與致病性.疫情于2003年2月傳播至香港,隨后迅速向全球各地蔓延.其致病因子于2003年3月被鑒定為一種新的冠狀病毒,被命名為SARS冠狀病毒(SARS-CoV).冠狀病毒是一類球形、有包膜的病毒,基

2、因組為長約30kb的單股正鏈RNA,主要引起人和動物的呼吸道與腸道疾病.SARS-CoV的基因組結(jié)構(gòu)為:5'-帽狀結(jié)構(gòu)-復(fù)制酶(rep)-刺突糖蛋白(S)-小包膜蛋白(E)-膜糖蛋白(M)-核衣殼蛋白(N)-polyA尾-3'.該研究用大腸桿菌表達(dá)出了SARS-CoV的結(jié)構(gòu)蛋白及3CLpro蛋白,檢測了SARS恢復(fù)期患者血清中的抗體情況,構(gòu)建了S與N蛋白的DNA疫苗,進(jìn)行了小鼠免疫試驗,并篩選出了數(shù)段可特異阻斷S、N基因表達(dá)的小干擾RN

3、A(siRNA).該系列研究對于了解SARS-CoV的免疫學(xué)特點及為發(fā)展SARS-CoV感染的防治方法有一定參考意義.結(jié)論:1、該研究用大腸桿菌表達(dá)出了SARS-CoV的結(jié)構(gòu)蛋白并用SARS恢復(fù)期血清對其進(jìn)行抗原性分析,結(jié)果表明N蛋白具有強抗原性,而S、M蛋白次之,S蛋白的抗原決定蔟可能主要位于其氨基端.結(jié)果提示,體內(nèi)產(chǎn)生抗S蛋白抗體是否為SARS恢復(fù)的必須條件還有待進(jìn)一步研究.2、分別構(gòu)建S、N蛋白DNA疫苗免疫小鼠,表明該兩種結(jié)構(gòu)蛋

4、白以DNA免疫方式均可誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答,其中N蛋白還可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答.結(jié)果還表明,S蛋白不同肽段的抗體反應(yīng)具有明顯的差異,因此,誘導(dǎo)全面持久的抗S蛋白體液免疫應(yīng)答是發(fā)展SARS疫苗需要解決的問題,而聯(lián)合N蛋白以誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和增強S蛋白的體液免疫應(yīng)答對于發(fā)展SARS疫苗可能具有重要意義.3、用細(xì)胞模型觀察到siRNA可有效抑制SARS-CoV N與S基因的表達(dá),將siRNA表達(dá)載體與N-EGFP融合基因表達(dá)質(zhì)粒共注射小鼠骨骼肌,發(fā)現(xiàn)