大鼠毛囊干細(xì)胞的鑒定及選擇其最適培養(yǎng)液的研究.pdf

1、目的：對所培養(yǎng)的毛囊干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，并比較3種不同培養(yǎng)基對于大鼠毛囊干細(xì)胞增殖情況的影響。
　　方法：取潔凈SD大鼠乳鼠觸須部組織，聯(lián)合使用顯微分離技術(shù)+中性蛋白酶II消化+胰蛋白酶和乙二胺四乙酸混合液消化法獲得細(xì)胞懸液，使用Ⅳ型膠原差速貼壁法篩選毛囊干細(xì)胞。通過倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)特征，吉姆薩染色、流式細(xì)胞儀CD34、β1-整合素（CD29）及CK15檢測，成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色、成脂誘導(dǎo)后油紅O檢測聯(lián)合用于鑒定所獲得細(xì)胞為具

2、有多向分化能力的毛囊干細(xì)胞。之后取顯微分離法+二部酶消化法所得細(xì)胞懸液計數(shù)后按細(xì)胞量平均分為3組，分別使用DMEM/F12培養(yǎng)+體積分?jǐn)?shù)10％胎牛血清、角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基以及角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基+體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清分三組進(jìn)行培養(yǎng)，從細(xì)胞活率、生長曲線、流式細(xì)胞儀鑒定標(biāo)記物幾個方面對三組培養(yǎng)后的干細(xì)胞進(jìn)行比較，從而間接判斷三種不同培養(yǎng)基對于毛囊干細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果：大鼠毛囊干細(xì)胞生長狀況良好，CK15、CD34、

3、β1-整合素（CD29）表達(dá)陽性，成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色陽性、成脂誘導(dǎo)后油紅O陽性，此3組間細(xì)胞活率差異無顯著性意義（P>0.05）。生長曲線顯示：生長速度角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基+體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清>DMEM/F12培養(yǎng)+體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清>角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（P<0.05）。DMEM/F12+10%胎牛血清組中CK15、CD34、β1-整合素（CD29）表達(dá)均低于其他2組（P<0.05），角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基組CD34的表達(dá)高于