小麥條銹病新抗源L693抗性基因的EST分子標(biāo)記作圖與共線性片段分析.pdf

1、小麥條銹病是由條形柄銹菌（Puccinia striiformis f.sp.Tritic）引起的世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生的小麥流行病害。中國(guó)是一個(gè)人口大國(guó)，小麥?zhǔn)亲钪饕目诩Z之一，小麥條銹病對(duì)我國(guó)小麥產(chǎn)量影響尤其大。我國(guó)小麥條銹病流行體系更為復(fù)雜，條銹菌有越冬區(qū)和越夏區(qū)，很難從空間和時(shí)間上阻斷，使得防控工作很難取得成效。諸多學(xué)者研究指出，選育抗病品種和發(fā)掘新的抗病資源是防治小麥條銹病最有效的途徑，不斷發(fā)現(xiàn)新的抗病基因以應(yīng)對(duì)新突變的毒性小種。

2、歷次大的條銹病流行，迫切要求我們多樣化主栽品種，不能單一推廣某個(gè)系列小麥，只能不斷豐富抗性基因資源，抗條銹病研究是沒(méi)有止境的斗爭(zhēng)，任重而道遠(yuǎn)。
　　前期的研究通過(guò)SSR分子標(biāo)記，已經(jīng)確認(rèn)抗病新品系L693的抗條銹病基因YrL693(YrYU25)在小麥1B染色體上，并篩選到多對(duì)SSR標(biāo)記，但標(biāo)記不夠多，需要通過(guò)其他分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)一步加密。
　　本研究是以抗病親本L693與感病親本L661雜交得到的F2后代和F2∶3家系為作圖

3、群體。首先查找文獻(xiàn)中報(bào)道的小麥1B染色體上的EST分子標(biāo)記，進(jìn)行多態(tài)性篩選，更多的EST標(biāo)記設(shè)計(jì)需要從GrainGene網(wǎng)站下載1B染色體上EST資源，設(shè)計(jì)EST-STS標(biāo)記，用以多態(tài)性篩選。之后用連鎖EST引物對(duì)應(yīng)的EST序列與短柄草、水稻、高粱基因組進(jìn)行比較基因組學(xué)分析，確定YrL693基因所在范圍在短柄草、水稻、高粱上的共線性片段。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.抗病親本L693和感病親本L661雜交得到的F1代抗病，F(xiàn)1代自交

4、得到的F2代出現(xiàn)抗感分離，卡方檢驗(yàn)符合3R∶1S的分離比;F2∶3家系各行也出現(xiàn)抗感分離，經(jīng)卡方檢驗(yàn)符合1R∶2H∶1S的分離比，由此足以證明L693的抗條銹性是受一對(duì)顯性基因控制。這個(gè)L693的抗性基因暫時(shí)命名為YrL693。
　　2.前期工作已經(jīng)通過(guò)SSR標(biāo)記將YrL693定位在1B染色體上，本研究采用EST分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)一步加密遺傳圖譜。經(jīng)過(guò)F2群體基因組DNA的PCR擴(kuò)增和聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，共得到8對(duì)連鎖的EST-S

5、TS標(biāo)記:CD77、WE173、WE201、BE443300、BE518403、BE444094、BE404005和BE405692，在構(gòu)建的遺傳連鎖圖譜上的位置分別是:1.186 cM、0.118 cM、1.011 cM、0.758 cM、0.853 cM、0.937 cM、0.948 cM和1.282 cM。其中，BE443300和BE444094分析的基因型呈3∶1，其余6對(duì)分析的基因型呈1∶2∶1。
　　3.用篩選到的8對(duì)

6、EST-STS引物以及饒和斐報(bào)道的共分離EST引物L(fēng)S36對(duì)應(yīng)的EST序列，與短柄草、水稻、高粱進(jìn)行比較基因組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)BE444094、BE518403、LS36對(duì)應(yīng)在短柄草3號(hào)染色體上2.22Mb(Bradi3g2616-Bradi3g27877)、水稻10號(hào)染色體上3.49Mb(Os10g0396400-Os10g0456500)和高粱1號(hào)染色體上8.12Mb(Sbo1g020230-Sb01g023110)的序列呈共線性。這些