針刺及針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)急性手術(shù)創(chuàng)傷大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及中樞Orexin系統(tǒng)參與針刺鎮(zhèn)痛的研究.pdf

1、急性手術(shù)創(chuàng)傷所致的術(shù)后疼痛是外科手術(shù)后出現(xiàn)的手術(shù)傷口局部疼痛，屬急性疼痛范疇。有資料顯示，外科手術(shù)后疼痛發(fā)生率高達(dá)19％-56％，其發(fā)生與手術(shù)麻醉方式的選擇等因素密切相關(guān)，疼痛程度以中度為主。術(shù)后疼痛嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量，因此選擇安全、有效、生理干擾小的麻醉方式是解決外科術(shù)后疼痛的主要途徑之一。
　　針刺鎮(zhèn)痛是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的特色，以其確切的臨床療效在臨床應(yīng)用中一直有著活躍的生命力。多項(xiàng)臨床資料顯示，針刺可廣泛應(yīng)用于顱腦手術(shù)、甲狀

2、腺切除術(shù)、肺切除術(shù)、胃切除術(shù)、膽囊切除術(shù)等多種外科手術(shù)，針刺不但能夠緩解患者的術(shù)后疼痛，而且能夠調(diào)節(jié)免疫功能，促進(jìn)創(chuàng)傷的恢復(fù)。深入研究針刺在手術(shù)創(chuàng)傷后疼痛中的作用對(duì)于闡釋針刺鎮(zhèn)痛的機(jī)理具有重要的意義。
　　回顧針刺鎮(zhèn)痛機(jī)理研究歷程可以發(fā)現(xiàn)，早期針刺鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究主要以急性傷害性疼痛刺激為致痛因素，與臨床疾病有一些差異。目前對(duì)于模擬臨床外科手術(shù)急性創(chuàng)傷的針刺研究很少，主要是因?yàn)槿鄙倥c臨床外科手術(shù)相對(duì)應(yīng)的急性痛動(dòng)物模型，因此為了深入開(kāi)展

3、針刺對(duì)于急性手術(shù)創(chuàng)傷疼痛的實(shí)驗(yàn)研究，急需建立急性手術(shù)創(chuàng)傷疼痛的小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｆ浠疽笠皇悄M臨床手術(shù)操作造成的急性手術(shù)創(chuàng)傷和疼痛，二是能及時(shí)進(jìn)行針刺干預(yù)并進(jìn)行疼痛的測(cè)試。這對(duì)于研究針刺鎮(zhèn)痛和針刺麻醉的機(jī)制，顯然是十分重要的。
　　針刺鎮(zhèn)痛機(jī)制的主要研究成果有針刺鎮(zhèn)痛的神經(jīng)通路機(jī)制和針刺鎮(zhèn)痛的神經(jīng)化學(xué)機(jī)制兩個(gè)方面。阿片肽與針刺鎮(zhèn)痛的關(guān)系因首先被證實(shí)而成為經(jīng)典，而后非阿片肽系統(tǒng)在針刺鎮(zhèn)痛機(jī)制中的作用也吸引了更多的研究興趣。以往研究

4、已發(fā)現(xiàn)，針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)與中樞內(nèi)多種神經(jīng)肽有關(guān)，包括P物質(zhì)(SP)，血管活性腸肽(VIP)，神經(jīng)肽Y(NPY)等。
　　Orexin是一種完全由下丘腦生成的神經(jīng)肽，分Orexin A和B兩種(OXA，OXB)，分別是33肽和28肽，它們均由一種前體Prepro-Orexin生成。Orexin的受體是G蛋白偶聯(lián)受體，有OX1R和OX2R兩種亞型。Orexin在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)有廣泛的纖維投射，同時(shí)參與多種生理過(guò)程，包括睡眠覺(jué)醒、進(jìn)食行為、

5、心臟自律性以及神經(jīng)內(nèi)分泌。近年來(lái)越來(lái)越多的研究支持Orexins尤其是OXA在痛覺(jué)調(diào)制過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用。首先是在痛覺(jué)調(diào)制的各水平，包括中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)(PAG)、延髓頭端腹內(nèi)側(cè)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(RVM)、脊髓背角(DH)和背根神經(jīng)節(jié)(DRG)均存在下丘腦OXA能纖維直接投射;其次，行為學(xué)依據(jù)也表明，中樞給予外源性O(shè)XA對(duì)機(jī)械痛、熱痛有抑制作用，且其抗傷害作用不被納絡(luò)酮阻斷。以上證據(jù)提示OXA不但參與脊髓與脊髓上抗傷害反應(yīng)過(guò)程，亦可能

6、是通過(guò)參與疼痛的下行抑制系統(tǒng)進(jìn)而調(diào)節(jié)疼痛感受，且OXA可能是存在于阿片肽系統(tǒng)外的鎮(zhèn)痛物質(zhì)。
　　那么針刺鎮(zhèn)痛過(guò)程是否也調(diào)動(dòng)了OXA的激活，OXA對(duì)于針刺鎮(zhèn)痛是協(xié)同作用還是拮抗作用，其進(jìn)一步機(jī)制又如何？為了驗(yàn)證這一假說(shuō)，我們采用改良的開(kāi)腹手術(shù)建立的急性術(shù)后疼痛大鼠模型，從行為學(xué)到形態(tài)學(xué)等不同方面，從整體到分子等不同水平，運(yùn)用機(jī)械痛和熱痛測(cè)定方法，結(jié)合免疫組織化學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和激光共聚焦等方法，對(duì)針刺及針?biāo)?/p>

7、結(jié)合對(duì)急性手術(shù)創(chuàng)傷后疼痛的協(xié)同鎮(zhèn)痛作用和中樞Orexin系統(tǒng)參與針刺鎮(zhèn)痛的機(jī)理研究進(jìn)行探討。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.急性手術(shù)創(chuàng)傷模型的建立及評(píng)價(jià)
　　1.1麻醉藥乙醚對(duì)大鼠機(jī)械痛閾及熱痛閾的影響
　　為了排除麻醉藥乙醚對(duì)大鼠痛閾的影響，大鼠隨機(jī)分為正常組和麻醉組，每組各8只，麻醉組大鼠進(jìn)行乙醚全身麻醉并維持15min。結(jié)果顯示，與正常組相比，乙醚麻醉組大鼠的足機(jī)械痛閾(PWT)、腹機(jī)械痛閾(ACT)、足熱痛

8、閾(PWL)、熱水甩尾潛伏期(TFL)均無(wú)顯著改變(P＞0.05)。因足機(jī)械痛與腹機(jī)械痛均顯示出較穩(wěn)定的閾值，故后續(xù)試驗(yàn)采用該兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行痛閾測(cè)定。
　　1.2急性手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)大鼠腹機(jī)械痛和足機(jī)械痛閾的影響
　　大鼠隨機(jī)分為正常組，假手術(shù)組和模型組，每組各8只。在乙醚吸入麻醉下進(jìn)行大鼠腹部正中切口手術(shù)。假手術(shù)組是麻醉維持15分鐘，腹部剃毛、消毒。結(jié)果顯示，模型組大鼠術(shù)后0.5h時(shí)腹部即出現(xiàn)痛覺(jué)超敏并持續(xù)至24 h以上，與假手術(shù)

9、組相比均具有顯著性差異(P＜0.01)。而假手術(shù)組與正常組相比沒(méi)有明顯的痛閾改變。足部機(jī)械性閾值測(cè)定結(jié)果顯示，假手術(shù)組與正常組相比沒(méi)有明顯的痛閾改變。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠術(shù)后0.5 h時(shí)足部開(kāi)始出現(xiàn)痛覺(jué)超敏并持續(xù)至24 h，與正常組相比均有顯著性差異(P＜0.01)。
　　上述實(shí)驗(yàn)初步揭示了急性手術(shù)創(chuàng)傷疼痛造模及痛閾測(cè)定方法是切實(shí)可行的。
　　1.3芬太尼對(duì)模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用
　　為進(jìn)一步驗(yàn)證大鼠急性手術(shù)創(chuàng)傷模型

10、用于痛與鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)的可靠性，采用麻醉鎮(zhèn)痛藥芬太尼外周給藥，觀(guān)察模型大鼠痛閾的變化。大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組（Saline組）、芬太尼小劑量組、中劑量組和大劑量組，分別于術(shù)后即刻給予Saline0.2 ml、芬太尼5μg/kg、10μg/kg、20μg/kg肌肉注射。結(jié)果顯示，芬太尼10μg/kg與20μg/kg能夠劑量依賴(lài)性緩解大鼠腹部切口痛敏和足部痛敏，作用維持時(shí)間至術(shù)后2h，與Saline組相比具有顯著性差異（腹部P＜0.01，足部P＜

11、0.05）。小劑量芬太尼(5μg/kg)并不能緩解模型大鼠的腹部切口痛敏及足部痛敏。本測(cè)痛實(shí)驗(yàn)中PWT與ACT這兩個(gè)測(cè)痛指標(biāo)對(duì)最大鎮(zhèn)痛效果的反應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　小結(jié):腹部正中切口手術(shù)所致急性創(chuàng)傷模型能夠引起大鼠腹部和足部機(jī)械性痛敏，且痛敏持續(xù)達(dá)24 h以上。10μg/kg和20μg/kg芬太尼能夠劑量依賴(lài)性緩解該急性手術(shù)創(chuàng)傷所致的疼痛。實(shí)驗(yàn)顯示，該急性手術(shù)創(chuàng)傷大鼠的測(cè)痛模型是穩(wěn)定可靠的。
　　2.電針對(duì)手術(shù)創(chuàng)傷模型大鼠急

12、性痛的鎮(zhèn)痛作用
　　2.12/15Hz和2/100Hz電針對(duì)模型大鼠腹機(jī)械痛和足機(jī)械痛的影響
　　大鼠隨機(jī)分為模型組、假電針組、電針2/15Hz組和電針2/100Hz組，每組8-11只。電針結(jié)束后0.5h，1h，2h，4h，6h及24 h時(shí)測(cè)定腹機(jī)械痛和足機(jī)械痛。腹部測(cè)痛結(jié)果顯示，與模型組相比，術(shù)后0.5 h及1h時(shí)，兩種頻率電針對(duì)于腹部痛敏均有顯著緩解作用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);0.5 h時(shí)，電針2/15Hz組

13、與假電針組相比也有顯著性差異(P＜0.05)。但電針2/100Hz組與假電針組相比具有差異趨勢(shì)，但尚未達(dá)到顯著性差異。
　　足部測(cè)痛結(jié)果顯示，術(shù)后0.5 h時(shí)，兩種頻率電針均能緩解足部機(jī)械痛敏，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，其中0.5h時(shí)電針2/15 Hz組與假電針組相比也有顯著性差異(P＜0.05)。但電針2/100Hz組與假電針組相比具有差異趨勢(shì)而尚未達(dá)到顯著性差異。
　　2.2電針與芬太尼合用對(duì)模型大鼠腹機(jī)

14、械痛和足機(jī)械痛的影響
　　基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，2/15Hz電針即刻鎮(zhèn)痛效應(yīng)較2/100Hz明顯，因此選擇2/15Hz作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的電針參數(shù)。為觀(guān)察電針合用小劑量芬太尼的協(xié)同鎮(zhèn)痛作用，大鼠隨機(jī)分為Saline組（術(shù)后即刻注射Saline0.2 ml作為對(duì)照）、小劑量芬太尼組(5μg/kg)、電針合用Saline組、電針合用小劑量芬太尼組，每組7-8只。結(jié)果顯示，小劑量芬太尼(5μg/kg)注射后，腹部痛閾及足部痛閾與Saline組相比

15、沒(méi)有明顯改變(P＞0.05)。與Saline組相比，電針合用Saline組0.5 h時(shí)的腹部痛閾及足部痛閾顯著提高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　腹部痛閾測(cè)定結(jié)果還顯示，與小劑量芬太尼組相比，電針合用小劑量芬太尼組腹部痛閾在0.5 h、1h及24 h時(shí)均明顯升高，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與電針合用Saline組相比，電針合用小劑量芬太尼組腹部痛閾均值在術(shù)后24 h有升高趨勢(shì)。
　　足部痛閾測(cè)定結(jié)果還

16、顯示，與小劑量芬太尼組相比，電針合用小劑量芬太尼組足部痛閾在0.5 h、1h和4h至24 h內(nèi)均明顯升高，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與電針合用生理鹽水組相比，電針合用小劑量芬太尼組足部痛閾均值在0.5h、6h及24 h時(shí)均明顯升高，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　小結(jié):2/15Hz和2/100Hz兩種頻率電針對(duì)急性術(shù)后痛大鼠均有即刻鎮(zhèn)痛效應(yīng)。與單獨(dú)使用電針或小劑量芬太尼相比，2/15Hz電針與小劑量芬太尼合

17、用后對(duì)腹部和足部機(jī)械性痛閾的均值均有提高，不但即刻鎮(zhèn)痛效果得到顯著增強(qiáng)，而且出現(xiàn)后續(xù)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，時(shí)程明顯延長(zhǎng)。
　　3.鞘內(nèi)注射OXA、納洛酮及選擇性O(shè)X1R受體拮抗劑SB-334867對(duì)急性手術(shù)創(chuàng)傷模型大鼠腹機(jī)械痛及電針鎮(zhèn)痛的影響
　　3.1鞘內(nèi)注射OXA對(duì)模型大鼠腹機(jī)械痛閾的影響
　　大鼠隨機(jī)分為Saline組、OXA小劑量組、OXA中劑量組、OXA大劑量組，每組6-8只，手術(shù)結(jié)束后立即鞘內(nèi)注射Saline10μl

18、、OXA0.1 nmol、0.3nmol和1nmol。隨即進(jìn)行痛閾測(cè)定。結(jié)果顯示，與Saline對(duì)照組相比，OXA0.1nmol對(duì)模型大鼠痛閾沒(méi)有明顯作用。注射后0.5 h，OXA0.3 nmol和1nmol均能夠升高大鼠腹部機(jī)械性閾值，與Saline組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。OXA0.3nmol和1nmol兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.2鞘內(nèi)注射選擇性O(shè)X1R拮抗劑SB-334867及納絡(luò)酮對(duì)OXA鎮(zhèn)痛作用的影響

19、r>　　大鼠隨機(jī)分為Saline組、OXA0.3nmol組、SB-33486730nmol組、SB-33486730nmol+OXA0.3nmol組和納絡(luò)酮28nmol+OXA0.3nmol組，每組7-8只。 SB-33486730nmol及納絡(luò)酮28nmol為手術(shù)前鞘內(nèi)注射，OXA與Saline為術(shù)后即刻鞘內(nèi)注射。結(jié)果顯示，術(shù)后0.5 h時(shí)，與Saline組相比，OXA0.3nmol組的ACT明顯升高(P＜0.05)，而SB-3348

20、6730nmol組大鼠的痛閾沒(méi)有顯著改變(P＞0.05);SB33486730 nmol+OXA0.3nmol組與OXA0.3nmol組相比，腹機(jī)械痛閾升高不明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。納絡(luò)酮28nmol+OXA0.3nmol組腹機(jī)械痛閾與OXA0.3nmol組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。表明OXA的鎮(zhèn)痛作用可被OX1R拮抗劑所阻斷，但不被阿片受體拮抗劑納洛酮所阻斷。
　　3.3鞘內(nèi)注射OXA對(duì)電針鎮(zhèn)痛的影響

21、r>　　大鼠隨機(jī)分為Saline組、電針組、OXA0.3nmol組和電針+OXA0.3nmol組，每組8-11只。電針結(jié)束后即刻注射OXA0.3nmol。結(jié)果顯示，鞘內(nèi)注射OXA0.3nmol后1h，與OXA0.3nmol組相比，電針+OXA0.3nmol組大鼠腹部機(jī)械性閾值顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。與電針組相比，電針+OXA0.3nmol組的腹部機(jī)械痛閾有升高趨勢(shì)。
　　3.4鞘內(nèi)注射選擇性O(shè)X1R拮抗劑SB-3

22、34867對(duì)電針鎮(zhèn)痛的影響
　　大鼠隨機(jī)分為DMSO組、電針組、SB-33486730nmol組、SB-334867100nmol組、SB-33486730nmol+電針組和SB-334867100nmol+電針組，每組7-11只。結(jié)果顯示，與DMSO組相比，SB-33486730nmol和SB-334867100nmol對(duì)模型大鼠的痛閾無(wú)明顯影響(P＞0.05);與電針組相比，SB-334867100nmol+電針組痛閾明顯降低

23、，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。但SB-33486730nmol+電針組與電針組相比，痛閾沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。
　　3.5鞘內(nèi)注射選擇性O(shè)X1R拮抗劑SB-334867100nmol對(duì)芬太尼鎮(zhèn)痛的影響
　　大鼠隨機(jī)分為Saline組、芬太尼10μg/kg組、SB-334867100nmol組和SB-334867100nmol+芬太尼10μg/kg組，每組7-8只。SB-334867為術(shù)前即刻鞘內(nèi)注射，芬太尼

24、為術(shù)后即刻肌肉注射。結(jié)果顯示，與Saline組相比SB-334867100nmol組痛閾沒(méi)有顯著改變;0.5h和1h時(shí)，芬太尼10μg/kg組和SB-334867100nmol+芬太尼10μg/kg組與Saline組比較分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，芬太尼10μg/kg組和SB-334867100nmol+芬太尼10μg/kg組之間比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即預(yù)先鞘內(nèi)注射SB-334867100nmol對(duì)芬太尼引起的腹部機(jī)械性閾值升高沒(méi)

25、有顯著影響(P＞0.05)。
　　小結(jié):
　　(1)鞘內(nèi)注射OXA對(duì)急性手術(shù)創(chuàng)傷模型大鼠具有鎮(zhèn)痛作用，OXA合用電針后鎮(zhèn)痛效果增強(qiáng);
　　(2)鞘內(nèi)注射選擇性O(shè)X1R拮抗劑能夠拮抗OXA產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用，SB-334867大劑量(100nmol)能拮抗電針的鎮(zhèn)痛作用。
　　(3)μ阿片受體拮抗劑納絡(luò)酮不能拮抗OXA產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用，SB-334867100nmol也未能拮抗μ阿片受體激動(dòng)劑芬太尼的鎮(zhèn)痛效果。
　

26、　綜上，中樞OXA可能通過(guò)OX1R介導(dǎo)參與電針對(duì)急性手術(shù)創(chuàng)傷的鎮(zhèn)痛作用。
　　4.電針對(duì)大鼠中樞OXA及OX1R表達(dá)的影響
　　4.1電針對(duì)模型大鼠下丘腦、PAG和脊髓OXA蛋白含量的影響
　　運(yùn)用ELISA方法檢測(cè)正常組、模型組、電針2/15Hz組和電針2/100Hz組下丘腦、PAG和脊髓中OXA的蛋白含量。結(jié)果顯示，與正常組相比，手術(shù)后1h時(shí)模型組大鼠下丘腦、PAG和脊髓的OXA含量顯著減少，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

27、P＜0.05);與模型組相比，電針2/15Hz可以顯著上調(diào)下丘腦、PAG和脊髓的OXA的含量，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。電針2/100Hz組下丘腦、PAG和脊髓OXA的表達(dá)和模型組相比沒(méi)有顯著差異。
　　4.2電針對(duì)模型大鼠下丘腦OXA mRNA表達(dá)的影響
　　運(yùn)用RT-PCR方法檢測(cè)術(shù)后2h、4h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)正常組、模型組和電針2/15Hz組下丘腦OXA的mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示，與正常組相比，術(shù)后2h下丘腦OXA

28、mRNA表達(dá)下降(P＜0.05);與模型組相比，電針可以顯著增加下調(diào)的OXA mRNA(P＜0.05)。而術(shù)后4h各組之間OXA mRNA表達(dá)沒(méi)有顯著差異。
　　4.3電針對(duì)模型大鼠下丘腦Orexin能神經(jīng)元表達(dá)的影響
　　運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)正常組、模型組、電針2/15Hz組和電針2/100Hz組大鼠下丘腦Orexin能神經(jīng)元的表達(dá)。結(jié)果顯示，術(shù)后2h時(shí)，與正常組相比，模型組和電針組下丘腦Orexin能神經(jīng)元表達(dá)均沒(méi)有顯著

29、改變。
　　4.4正常大鼠下丘腦、PAG、延髓和脊髓OX1R的表達(dá)
　　OXA的功能要通過(guò)與受體結(jié)合而發(fā)揮。運(yùn)用免疫組化法標(biāo)記正常大鼠下丘腦、中腦、延髓和脊髓的OX1R表達(dá)。結(jié)果顯示，在下丘腦腹側(cè)、PAG、延髓腹內(nèi)側(cè)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和脊髓背角，OX1R呈陽(yáng)性表達(dá)與分布。
　　4.5電針對(duì)模型大鼠下丘腦、PAG、脊髓OX1R mRNA表達(dá)的影響
　　運(yùn)用RT-PCR方法檢測(cè)正常組、模型組、電針2/15Hz組和電針2/100

30、Hz組大鼠術(shù)后2h下丘腦OX1R mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組下丘腦OX1R mRNA表達(dá)上調(diào);與模型組相比，電針2/15Hz組能夠進(jìn)一步上調(diào)下丘腦OX1R的表達(dá)(P＜0.05)，而電針2/100Hz組沒(méi)有明顯變化。
　　同樣方法檢測(cè)術(shù)后2 h PAG中OX1R mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組PAG OX1R mRNA表達(dá)下調(diào);與模型組相比，電針組能夠顯著上調(diào)PAG中OX1R的表達(dá)(P＜0.05)

31、，而電針2/100Hz組沒(méi)有明顯變化。
　　同樣方法檢測(cè)術(shù)后2h脊髓OX1R mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組脊髓OX1R mRNA表達(dá)下調(diào);與模型組相比，電針組能夠上調(diào)脊髓OX1R的表達(dá)(P＜0.05)，而電針2/100Hz組沒(méi)有明顯變化。
　　4.6模型大鼠術(shù)后下丘腦Orexin能神經(jīng)元纖維投射
　　運(yùn)用免疫雙標(biāo)的方法，觀(guān)察OXA-LI陽(yáng)性細(xì)胞與NeuN的雙標(biāo)，結(jié)果顯示，OXA主要存在于NeuN陽(yáng)性神

32、經(jīng)元的胞漿中;且手術(shù)后Orexin能纖維投射可見(jiàn)明顯變粗。
　　小結(jié):手術(shù)后2h，模型大鼠下丘腦、PAG與脊髓的OXA含量減少，下丘腦OXAmRNA表達(dá)下調(diào)，而電針能夠上調(diào)OXA的含量及OXA mRNA的表達(dá);模型大鼠下丘腦OX1R mRNA表達(dá)上調(diào)，而PAG和脊髓OX1R mRNA表達(dá)下調(diào)，而電針能夠在原有基礎(chǔ)上進(jìn)一步上調(diào)OX1R mRNA的表達(dá)。提示電針有可能通過(guò)調(diào)控中樞Orexin系統(tǒng)而實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)痛作用。
　　結(jié)論:

33、>　　圍手術(shù)期針刺對(duì)大鼠急性手術(shù)創(chuàng)傷后疼痛有即刻鎮(zhèn)痛效應(yīng)，電針與小劑量芬太尼合用能夠增強(qiáng)電針鎮(zhèn)痛的效應(yīng)，并能延長(zhǎng)電針鎮(zhèn)痛時(shí)程;鞘內(nèi)注射OXA可以緩解急性手術(shù)創(chuàng)傷后疼痛，納洛酮未能拮抗OXA的鎮(zhèn)痛效果，鞘內(nèi)注射選擇性O(shè)X1R拮抗劑SB-334867能夠分別拮抗OXA以及電針的鎮(zhèn)痛效果，但不能拮抗芬太尼鎮(zhèn)痛效果;電針能夠上調(diào)急性創(chuàng)傷大鼠下丘腦、PAG和脊髓內(nèi)源性O(shè)XA和OX1R mRNA的表達(dá)，以上提示OXA可能通過(guò)下行抑制系統(tǒng)的OX1R參