RSK4在人體正常組織的分布及其在腎細胞癌中的表達和功能的初步研究.pdf

1、【研究背景】
　　腎細胞癌（renalcellcarcinoma，RCC）是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，約占成年人所有上皮來源惡性腫瘤的4％。由于RCC起病隱匿，常導致約30％患者在初次確診時已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移；另外，該腫瘤對放化療不敏感，且在手術切除后易出現(xiàn)復發(fā)，給臨床診療工作帶來極大的困難。因此，探索針對RCC的敏感特異的早期診斷、鑒別診斷和評估預后的標志物，以及新的、有效的治療靶點十分必要。
　　RSK4是核糖體s6蛋白激酶(

2、ribosomals6kinase，RSK)基因家族成員之一，由746個氨基酸組成，作為RSK家族的新成員，其分子功能甚不清楚。迄今為止，RSK4相關的文獻報道很少，其組織分布尚未完全明確，僅有個別文獻報道了其mRNA在人部分正常組織的分布，而關于RSK4蛋白在人正常及常見腫瘤組織的分布尚未見系統(tǒng)性報道。此外，目前研究大多認為，RSK4是一種潛在的抑癌基因，即RSK4在一些腫瘤中表達降低且其過表達可以抑制腫瘤細胞系的侵襲及轉(zhuǎn)移。而關于R

3、SK4在RCC的表達及其功能仍知之甚少，僅有一篇文獻報道RCC新鮮腫瘤組織中的RSK4mRNA水平低于癌旁組織，且作者認為其可能的機制是RSK4通過誘導老化而抑制腫瘤細胞的增殖。因此，RSK4蛋白在人正常及常見腫瘤組織的表達與分布究竟如何?RSK4在RCC中的表達情況究竟如何？其功能是促癌還是抑癌作用？正是本研究旨在解決的問題。
　　【目的】
　　1.研究RSK4在人體正常組織和常見惡性腫瘤組織的表達，為深入研究其功能提供研

4、究基礎；
　　2.研究RSK4在RCC的表達，分析其與患者臨床病理特征以及預后的關系；
　　3.初步探討RSK4在RCC細胞系中的表達及其功能的分子機制。
　　【方法】
　　1.應用組織芯片技術和免疫組織化學EnVision法，分別檢測RSK4蛋白在人30種正常組織和54種腫瘤組織的表達；
　　2.應用免疫組織化學EnVision法研究RSK4在31例RCC芯片組織及70例RCC手術標本中的表達情況；

5、>　　3.應用卡方檢驗分析RSK4的表達與RCC患者臨床病理特征的關系；
　　4.應用Kaplan-Meier法及Cox風險回歸模型分析RSK4的表達與患者預后的關系，并繪制生存曲線；
　　5.應用實時定量PCR及WesternBlot檢測RSK4在RCC細胞系RPC及GRC-1中的表達；
　　6.應用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術過表達或低表達RCC細胞系中RSK4，并從蛋白和mRNA水平進行驗證；
　　7.應用流式細胞術檢測

6、RSK4的表達變化對RCC細胞周期的影響；
　　8.應用Transwell技術檢測RSK4的表達變化對RCC細胞浸潤及遷移能力的影響。
　　【結果】
　　1.人30種正常組織有12種組織不同程度的表達RSK4，其中胰腺導管上皮、涎腺上皮細胞、皮膚的汗腺上皮細胞及扁桃體的生發(fā)中心B淋巴細胞等呈現(xiàn)RSK4強陽性表達，而腎小管上皮細胞、子宮內(nèi)膜腺上皮細胞、心肌細胞及肝細胞等RSK4的表達較弱；而54種腫瘤組織中有14種組織出

7、現(xiàn)RSK4強弱不等的陽性表達，其中腎透明細胞癌、子宮透明細胞癌、卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌及胃腺癌的RSK4表達較強，而乳腺浸潤性導管癌及肝細胞肝癌等表達較弱；
　　2.RSK4在RCC組織芯片及手術收集的RCC標本中的陽性率分別為74％（23/31）和55％（39/70）；
　　3.31例RCC芯片組織中，RSK4的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型及有無淋巴結轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移均無明顯相關性（P>0.05），但與腫瘤的F

8、uhrman核分級（P=0.032）和分期（P=0.029）顯著正相關，其陽性表達隨著分期或分級的增高而增強；
　　4.70例手術收集的RCC標本中，RSK4的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小及有無遠處轉(zhuǎn)移也均無明顯相關性（P>0.05），但其陽性表達與腫瘤的高Fuhrman分級（P<0.001）、高病理分期（P=0.006）及出現(xiàn)淋巴結轉(zhuǎn)移（P=0.012）顯著正相關；另外，RSK4的陽性表達在不同RCC病理類型中存在顯著性差異

9、（P=0.038），表現(xiàn)為透明細胞癌（77.8％，14/18）高于乳頭狀癌（50％，21/42），而后者又高于嫌色細胞癌（16.7％，1/6），且乳頭狀癌中2型（71.4％，20/28）的RSK4陽性率顯著高于1型（7.1％，1/14，P<0.001））；
　　5.單因素及多因素生存分析顯示，RSK4陽性表達與RCC患者不良預后顯著相關（P=0.001）；同時，RSK4的陽性表達還與乳頭狀癌患者的不良預后亦相關（P=0.032）；

10、
　　6.實時定量PCR和WesternBlot結果表明，RCC細胞系中RSK4的mRNA和蛋白水平高于正常腎小管上皮細胞系，且不同的RCC細胞系間RSK4的表達水平不同；
　　7.流式細胞術檢測細胞周期結果顯示，過表達RSK4的RPC細胞與未處理RPC細胞相比，其處于G0-G1期的細胞比例減少（71.08±0.51vs.73.46±0.24，P<0.05），處于S期的細胞比例上升（17.95±0.18vs.15.69±0.

11、36，P<0.05），但G2-M期的細胞比例未見明顯差異(10.97±0.49vs.10.85±0.39，P>0.05)；而低表達RSK4的GRC-1細胞與未處理GRC-1細胞相比，處于G0-G1期的細胞比例明顯升高（75.39±0.25vs.59.68±0.21，P<0.05），而處于S期和G2-M期的細胞比例則明顯下降（19.85±0.87vs.27.92±0.87；4.76±0.14vs.12.40±0.27，P<0.05）；

12、r>　　8.Transwell實驗發(fā)現(xiàn)，過表達RSK4的RPC細胞，其發(fā)生侵襲和遷移的細胞數(shù)明顯增加，是未處理RPC組的2.2倍（2.2±0.11vs.1，P<0.05）；而低表達RSK4的GRC-1細胞，其發(fā)生侵襲和遷移的細胞數(shù)則明顯減少，約為未處理RPC組的1/3（0.36±0.05vs.1，P<0.05）。
　　【結論】
　　1.首次系統(tǒng)研究并揭示了RSK4蛋白在人類正常組織和常見惡性腫瘤組織的表達與分布；