S100A2在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的:S100A2是S100家族的一員，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞內(nèi)外的功能，如增殖、凋亡，分化等。近些年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)S100A2在腫瘤組織中的表達(dá)水平及其活性變化可能促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。多項(xiàng)研究表明S100A2在多種不同類型腫瘤組織中的表達(dá)存在異常，如結(jié)腸癌、喉鱗狀細(xì)胞癌、頭頸癌、前列腺癌、乳腺癌等，查閱相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)有關(guān)于S100A2在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其功能目前尚無(wú)研究報(bào)道。本課題主要探究S100A2在腎透明細(xì)胞癌的腫瘤組織和相應(yīng)的

2、瘤旁組織中的表達(dá)情況，研究S100A2對(duì)腎腫瘤細(xì)胞周期變化及增殖能力的影響,進(jìn)而探討S100A2在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生中所起到的作用，為臨床診治腎腫瘤提供新的線索。
　　方法:①實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time PCR)檢測(cè)46例腎透明細(xì)胞癌及其相應(yīng)的瘤旁組織中S100A2的mRNA表達(dá)水平，通過(guò)western-blot和免疫組織化學(xué)的方法S100A2蛋白在腎透明細(xì)胞癌及其相應(yīng)的癌旁組織的表達(dá)水平;②Western-blot

3、以及實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株769-P，786-O，OS-RC-2和正常腎小管上皮HK2細(xì)胞株中S100A2的mRNA及蛋白水平的表達(dá);③通過(guò)構(gòu)建過(guò)表達(dá)S100A2的慢病毒質(zhì)粒，培育過(guò)表達(dá)S100A2的穩(wěn)轉(zhuǎn)786-O及769-P腎癌細(xì)胞株;④通過(guò)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)及MTS實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)正常的786-O及769-P及相應(yīng)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的周期及增殖情況。
　　結(jié)果:①S100A2的mRNA水平在腎透明細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)本組織中的表達(dá)顯著

4、下調(diào)(p＜0.01)，其相對(duì)應(yīng)的組織蛋白水平與mRNA變化一致;②在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-0、769-P、OS-RC-2中，S100A2的mRNA及蛋白表達(dá)水平比HK2細(xì)胞株低（p值均＜0.05），這與腫瘤標(biāo)本中結(jié)果相一致;③我們構(gòu)建成功了過(guò)表達(dá)S100A2質(zhì)粒，并進(jìn)行了慢病毒包裝，培育出了過(guò)表達(dá)S100A2的腎透明細(xì)胞癌穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系786-0和769-P;④與正常及轉(zhuǎn)染了空載體的786-O和769-P相比，過(guò)表達(dá)S100A2的細(xì)胞株