天蠶壯陽(yáng)散對(duì)雄性小鼠生殖細(xì)胞DNA損傷的保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：從男性生殖健康角度入手，運(yùn)用現(xiàn)代分子生物技術(shù)探討天蠶壯陽(yáng)散提高雄性小鼠精原細(xì)胞DNA損傷的自我修復(fù)能力和降低精子畸變率的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)機(jī)制，為開(kāi)發(fā)男性生殖保健品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1．小鼠精子畸形試驗(yàn)：首次給藥后5周末以頸椎脫臼法處死小鼠。剪開(kāi)腹膜，取出睪丸，分離附睪。按wyrobek方法制片，鏡檢。在高倍鏡下檢查精子畸形。2．小鼠精原細(xì)胞SCE試驗(yàn)：采用呂群等方法略加修改，取45mgIUrd和等量蔗糖混勻后壓成小藥片，埋于小

2、鼠腹部皮下，仔細(xì)縫合，于埋植IUrd藥片28h腹腔注射待測(cè)物。注藥30h后(即埋植IUrd58h)處死小鼠，取出睪丸。于處死動(dòng)物前6h腹腔注射秋水仙素(4mg/kg)。精原細(xì)胞染色體制備和姐妹染色單體差別染色按常規(guī)方法進(jìn)行。SCE分析時(shí)，選擇摻入IUrd后經(jīng)過(guò)兩個(gè)復(fù)制周期，色差鮮明，含有二倍體數(shù)的中期分裂相觀察計(jì)數(shù)．計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)為：凡在染色體端部出現(xiàn)的互換計(jì)為一次SCE，在染色休中間出現(xiàn)的互換計(jì)為兩次SCE。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)20個(gè)中期分裂相，

3、然后算出每個(gè)細(xì)胞中SCE平均值。3．小鼠生殖細(xì)胞UDS試驗(yàn)：按Sega法的改良方法進(jìn)行，將天蠶壯陽(yáng)散水煎液按所需劑量給小鼠灌胃給藥；同時(shí)腹腔注射氫化可的松，小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(8mg/Kg)麻醉，仰面固定，用75％酒精消毒下腹部皮膚，剪開(kāi)陰囊，用微量注射器每側(cè)睪丸注入<'3>H-TDR20，消毒切口，不縫合，數(shù)日后自愈。17d后，頸椎脫臼處死小鼠，取精子，制備濾膜，干燥后將濾膜放入閃爍瓶中，加閃爍液5m1，用液體閃爍儀測(cè)定每分鐘放射

4、計(jì)數(shù)。 各實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4大組，即陰性對(duì)照組(NS ip)；天蠶壯陽(yáng)散水煎液誘變組(5×，10×，20×人的臨床常用劑量ig)；天蠶壯陽(yáng)散水煎液抗誘變組(5×，10×，20×人的臨床常用劑量ig+氫化可的松(25mg/kg/d)ig)；陽(yáng)性對(duì)照組(即腎陽(yáng)虛組)。每組5只動(dòng)物。 結(jié)果：1．小鼠精子畸形試驗(yàn)：天蠶壯陽(yáng)散水煎液各劑量組誘發(fā)的小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著差別。天蠶壯陽(yáng)散水煎液各劑量組對(duì)由氫化可的松誘發(fā)的

5、小鼠精子畸形有明顯的抑制作用，且隨劑量升高，降低作用逐漸增強(qiáng)，呈劑量-反應(yīng)正相關(guān)趨勢(shì)。2．小鼠精原細(xì)胞SCE試驗(yàn)：天蠶壯陽(yáng)散水煎液各劑量組誘導(dǎo)的SCE與陰性對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異。天蠶壯陽(yáng)散水煎液可使氫化可的松誘導(dǎo)的小鼠精原細(xì)胞SCE頻率明顯降低，劑量一效應(yīng)關(guān)系明顯。經(jīng)雙側(cè)t檢驗(yàn)分析，除5倍人臨床常用劑量組外，天蠶壯陽(yáng)散抗誘變?cè)囼?yàn)其余各組與氫化可的松組比較，差異明顯。3．小鼠生殖細(xì)胞UDS試驗(yàn)：天蠶壯陽(yáng)散水煎液各劑量組誘導(dǎo)的UDS與陰

6、性對(duì)照組相比均無(wú)顯著性差異。氫化可的松對(duì)小鼠精子誘發(fā)了明顯的UDS反應(yīng)，天蠶壯陽(yáng)散水煎液可使氫化可的松誘發(fā)的小鼠精子UDS值明顯降低，在一定劑量范圍內(nèi)，隨著天蠶壯陽(yáng)散水煎液濃度的增加，UDS值降低的愈明顯。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示天蠶壯陽(yáng)散水煎液不引起小鼠精子畸變、精原細(xì)胞染色體畸變及小鼠生殖細(xì)胞UDS，即對(duì)小鼠生殖細(xì)胞無(wú)誘變作用，而且天蠶壯陽(yáng)散對(duì)氫化可的松引起小鼠精子畸型、精原細(xì)胞染色體畸變及氫化可的松誘發(fā)的小鼠生殖細(xì)胞IJDS均