α-亞麻酸新資源及其抗血栓作用研究.pdf

1、α-亞麻酸（α-inolenicacid；ALA）作為人體必需的不飽和脂肪酸，具有重要生理活性。國(guó)際醫(yī)學(xué)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)界的大量基礎(chǔ)研究、流行病學(xué)調(diào)查、動(dòng)物試驗(yàn)及臨床觀察表明，ALA具有以下多方面的生理功效，即預(yù)防心腦血管病、抑制癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移、抑制過敏反應(yīng)和抗炎作用、抑制衰老、增強(qiáng)智力和保護(hù)視力等功能。所以，ALA是重要的生物營(yíng)養(yǎng)原料。鑒于國(guó)內(nèi)、外ALA研究現(xiàn)狀的分析，花椒籽即椒目（Bungepricklyashseed；BPS）在陜西省僅

2、韓城市每年就多達(dá)4000余噸，全國(guó)大于12萬(wàn)噸。BPS是花椒的廢棄物，因此，從BPS中提取椒目仁油（Kernel-oilfrombungepricklyashseed；KO-BPS）和提純高純度ALA是廢物利用、利國(guó)利民的致富科技。國(guó)內(nèi)、外文獻(xiàn)及查新均未見從BPS中提取高純度ALA原料的報(bào)道。為尋求ALA等不飽和脂肪酸[主要是ALA和亞油酸(linoleicacid；LA)]新資源和探討其對(duì)人體可能產(chǎn)生的抗血栓藥理作用及特點(diǎn)，本課題主要

3、進(jìn)行了如下研究。
　　1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　1.1.優(yōu)選BPS中提取KO-BPS生產(chǎn)工藝；
　　1.2.探討高純度ALA純化技術(shù)路線和方法；
　　1.3.比較和研究KO-BPS、ALA的抗血栓活性。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法：
　　2.1.KO-BPS的提取工藝研究
　　2.1.1.壓榨法提取KO-BPS的工藝采用壓榨法從BPS中提取KO-BPS，測(cè)定出油率，采用HPLC法測(cè)定ALA含量。
　　2.

4、1.2.化學(xué)法提取KO-BPS的工藝研究采用化學(xué)法（根據(jù)ALA的極性使用不同極性的有機(jī)溶劑）從BPS中提取KO-BPS，測(cè)定出油率，采用HPLC法測(cè)定ALA含量。
　　2.1.3.SFE-C02法提取KO-BPS的工藝研究采用SFE-C02法從BPS中提取KO-BPS，測(cè)定出油率，HPLC法測(cè)定ALA的含量。
　　2.1.4.三種提取工藝的比較與分析比較三種工藝的出油率，提取的KO-BPS中ALA含量；綜合分析其工業(yè)化生產(chǎn)的

5、可行性，選擇最佳工藝。2.2KO-BPS提純高純度ALA根據(jù)ALA及KO-BPS的理化性質(zhì)，采用各種提取手段，從KO-BPS中提純ALA，使其含量達(dá)到95％以上。
　　2.2.1.皂化酸解采用皂化酸解的方法，使ALA從甘油酯狀態(tài)轉(zhuǎn)化為游離態(tài)。
　　2.2.2.梯度冷凍根據(jù)飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸在相同溫度下溶解度不同的原理，采用梯度冷凍的方法逐步將大部分的飽和脂肪酸析出并分離。2.2.3尿素包合根據(jù)桶狀的尿素分子可以將飽和脂

6、肪酸及部分單不飽和脂肪酸包合的原理，進(jìn)一步分離去除飽和脂肪酸和部分單不飽和脂肪酸。2.2.4硝酸銀絡(luò)合根據(jù)硝酸銀分子能夠和含有雙鍵的分子絡(luò)合，并且雙鍵越多，絡(luò)合能力越強(qiáng)，ALA為三烯酸，通過與硝酸銀絡(luò)合，達(dá)到分離純化目的。
　　2.3.ALA抗血栓活性研究
　　2.3.1.出、凝血時(shí)間的測(cè)定連續(xù)給小鼠灌胃不同劑量的ALA和1∶1混合不飽和脂肪酸（ALA/LA）10天，測(cè)定各組斷尾后的出、凝血時(shí)間。
　　2.3.2.CP

7、-AD誘發(fā)體內(nèi)血栓形成試驗(yàn)小鼠連續(xù)灌胃不同劑量的ALA和1∶1混合不飽和脂肪酸（ALA/LA）10天，用CP-AD誘發(fā)小鼠體內(nèi)血栓形成，觀察各組肺動(dòng)脈栓塞小鼠的存活率。
　　2.3.3.A-VBP血栓形成試驗(yàn)大鼠連續(xù)灌胃不同劑量的ALA和1∶1混合不飽和脂肪酸（ALA/LA）10天，復(fù)制A-VBP血栓模型，檢測(cè)各組血栓濕重。2.3.4體外比濁法測(cè)定血小板聚集試驗(yàn)大鼠連續(xù)灌胃不同劑量的ALA和1∶1混合不飽和脂肪酸（ALA/LA）1

8、0天后，采血，使用體外比濁法測(cè)定血小板聚集率。
　　3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　3.1.BPS中提取KO-BPS的工藝綜合分析比較從BPS中提取KO-BPS的三種工藝，考察出油率、ALA含量，所得油的色澤，澄明度等指標(biāo)，分析其工業(yè)化生產(chǎn)的可行性，最終選用傳統(tǒng)壓榨法進(jìn)行提取。
　　3.2.高純度ALA的提純方法BPS經(jīng)皂化酸解得游離的混合脂肪酸，依次經(jīng)梯度冷凍、尿素包合及硝酸銀絡(luò)合，得高純度ALA。經(jīng)HPLC分析，以本文的方法得

9、到的ALA含量高達(dá)95.6％以上。
　　3.3ALA和KO-BPS的抗血栓活性50mg/kg，100mg/kg和250mg/kg高純度ALA及混合不飽和脂肪酸（ALA/LA=1/1）給小鼠灌胃治療10天，顯著延長(zhǎng)出、凝血時(shí)間（P<0.01）；明顯降低CP-AD誘發(fā)性肺動(dòng)脈栓塞小鼠的死亡率（P<0.01）。35mg/kg，70mg/kg和175mg/kg高純度ALA及混合不飽和脂肪酸給大鼠灌胃治療10天，明顯抑制血小板在A-VBP中

10、絲線上的沉積（P<0.01）和大鼠體外血小板聚集（P<0.01）。
　　4.研究結(jié)論：
　　4.1.BPS是ALA新的木本油脂資源壓榨技術(shù)是其較理想的工業(yè)化生產(chǎn)方法。油脂中ALA等不飽和脂肪酸的含量高達(dá)80％，對(duì)于進(jìn)一步開發(fā)新型食用保健植物油，特別是精制ALA和LA等人體必需營(yíng)養(yǎng)素和研制保健或治療新藥具有重要實(shí)際意義。
　　4.2.冬化最佳工藝條件混合脂肪酸與乙醇等體積在-10℃下冬化24小時(shí)。采用該工藝條件重復(fù)試驗(yàn)證

11、實(shí)，ALA的含量可提高到39.90％，出油率可達(dá)70％。
　　4.3.尿素包合最佳工藝條件混合脂肪酸∶95％乙醇∶尿素=1∶2∶1，-12℃冷凍16h；采用該工藝條件重復(fù)試驗(yàn)證實(shí)，包合后的提取物中ALA的含量可達(dá)47.37％，收油率為59.92％。
　　4.4.硝酸銀絡(luò)合是ALA含量提高的關(guān)鍵性步驟，經(jīng)絡(luò)合后ALA的含量可達(dá)90％以上，收油率為20.18％，并且硝酸銀回收后可重復(fù)使用。
　　4.5.創(chuàng)新點(diǎn)第一，首次從B